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研究背景与目的：类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎症为主要表现的自身免疫性疾病。文献记载,乌头汤用于痹证的治疗疗效确切。乌头汤记载在《金匮要略》,是东汉时代著名医学家张仲景创制的一首名方,由川乌、麻黄、芍药、黄芪、炙甘草五味药材组成,具有温经祛寒,除湿止痛的功效,主治寒湿痹证。著名老中医李可先生在原方基础上加上黑豆及防风,创改良方,以达到制约制川乌毒性的目的,同时保持原方的药效。本研究是在课题组前期已开展的配伍减毒实验、谱效学研究和乌头汤生物碱对人类风湿关节炎滑膜细胞(RA-HFLS)增殖影响研究的基础上,进一步对乌头汤的配伍减毒、以及乌头汤生物碱抑制人类风湿关节炎滑膜细胞(HFLS)增殖的机制进行探究,为乌头汤的临床用药以及进一步的开发提供科学依据。方法：1乌头汤配伍减毒研究采用HPLS-ESI-MS技术分析生川乌单煎液、制川乌单煎液、金匮乌头汤、李可改良之乌头汤中乌头碱型生物碱类成分,比较炮制以及配伍对乌头碱型生物碱成分的影响,同时,利用UPLC-MS/MS技术测定生川乌单煎液、制川乌单煎液、金匮乌头汤、李可改良之乌头汤中6种乌头碱的含量,总结川乌减毒的规律。2乌头汤中麻黄总生物碱对TNF-a诱导RA-HFLS PI3K/Akt信号通路的调节作用利用体外培养HFLS,TNF-a诱导HFLS增殖模拟RA体内环境,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT法),比较乌头汤不同生物碱部位对HFLS的增殖抑制作用。设计3个给药组进行实验：乌头汤总生物碱组、制川乌总生物碱组、麻黄总生物碱组,并对各组细胞增殖抑制率进行统计分析。分析结果显示,麻黄总生物碱对RA-HFLS增殖抑制作用效果最佳,因此,以麻黄总生物碱为研究对象,进一步探究麻黄总生物碱抑制RA-HFLS增殖的作用机制。通过ELISA法测定TNF-a诱导的RA-HFLS细胞培养上清发现,观察麻黄总生物碱对RA-HFLS中TNF-a、IL-1β表达的影响。同时利用Western Blot方法检测不同浓度麻黄总生物碱对TNF-a诱导的RA-HFLS中非磷酸化及磷酸化的Akt和NF-κB蛋白表达的影响。结果在乌头汤配伍减毒研究部分,对比生川乌单煎液和制川乌单煎液中乌头碱型生物碱成分以及6种乌头碱的含量发现,药材中所含的毒性较强双酯型乌头碱经炮制后,水解成毒性较弱的单酯型乌头碱,从而达到减毒的炮制效果；通过与制川乌单煎液对比,发现金匮乌头汤和李可改良之乌头汤配伍后,已基本上不存在双酯型乌头碱水解减毒的作用,主要是单酯型乌头碱的成分损失起到减毒的作用,而且李可改良之乌头汤的配伍减毒效果要优于金匮乌头汤。在乌头汤中麻黄总生物碱对TNF-a诱导RA-HFLS PI3K/Akt信号通路的调节作用研究部分,体外细胞药效筛选研究表明麻黄总生物碱对RA-HFLS增殖的抑制作用强于乌头汤总生物碱和制川乌总生物碱。ELISA检测结果显示麻黄总生物碱能降低RA-HFLS中TNF-α、IL-1β表达水平,并呈剂量依赖性。Western Blot方法分析显示不同剂量的麻黄总生物碱均能下调RA-HFLS磷酸化的Akt和NF-κB蛋白表达,并呈剂量依赖性,但对RA-HFLS中非磷酸化的Akt和NF-κB蛋白表达则无抑制作用。结论乌头汤在炮制过程中双酯型乌头碱水解成单酯型乌头碱的基础上,通过配伍来进一步减少单酯型乌头生物碱的成分,从而起到减毒的效果,同时在配伍过程中双酯型乌头碱水解减毒发挥的作用非常微弱。0.25mg/ml～1.00mg/ml的麻黄总生物碱可以降低RA-HFLS中TNF-α、IL-1β表达水平,同时也降低Akt磷酸化水平,下调磷酸化NF-κB蛋白表达,抑制RAFLS增殖,发挥促凋亡及抗炎作用。