【摘 要】
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相关研究表明红细胞能转录表达多种免疫相关因子,但是补体相关基因是否在红细胞上表达及其转录表达水平还不清楚。随着抗生素在畜牧业中被广泛应用甚至滥用,导致了多重耐药或广泛耐药的大肠杆菌出现和流行,使得预防和控制大肠埃希氏菌病更加困难,而细菌在机体的清除主要是靠吞噬细胞的吞噬和补体的溶解作用,但鸡红细胞免疫在大肠杆菌感染中的作用缺乏系统的研究。为了探究鸡红细胞上补体相关基因的表达水平及大肠杆菌对鸡红细胞
【基金项目】
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国家重点研发计划项目（2016YFD0500800）; 中美新发和再发传染病合作项目（E090090201-3）
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相关研究表明红细胞能转录表达多种免疫相关因子,但是补体相关基因是否在红细胞上表达及其转录表达水平还不清楚。随着抗生素在畜牧业中被广泛应用甚至滥用,导致了多重耐药或广泛耐药的大肠杆菌出现和流行,使得预防和控制大肠埃希氏菌病更加困难,而细菌在机体的清除主要是靠吞噬细胞的吞噬和补体的溶解作用,但鸡红细胞免疫在大肠杆菌感染中的作用缺乏系统的研究。为了探究鸡红细胞上补体相关基因的表达水平及大肠杆菌对鸡红细胞补体相关基因表达的影响。本试验利用RT-PCR技术验证补体相关基因在红细胞中的表达;将红细胞与大肠杆菌标准菌液在体外分别作用0.25 h、0.5 h、1 h和2 h后运用间接免疫荧光和扫描电镜技术观察红细胞与大肠杆菌是否有黏附作用;并将大肠杆菌标准菌液接种鸡,在接种后第1、3和7天采样,用荧光定量PCR技术对体外互作后的红细胞和体内试验的红细胞测定其补体相关基因的转录表达变化,以探究大肠杆菌对鸡红细胞补体相关基因转录表达的影响。试验结果表明:（1）在正常鸡红细胞中存在补体相关基因CD93、C1q、C1s、C2、C3、C3AR1、C4、C4A、C5、C5AR1、C6、C7、C8G、CFI、MBL的表达。（2）体外结果显示红细胞上有大肠杆菌黏附,且C4、C4A和MBL基因的表达量在0.25 h低于对照组,其它基因表达量均高于对照组或与对照组差异不显著。（3）体内试验结果显示CD93、C1q、C1s、C2、C3、C3AR1、C5AR1和C6表达量在第1、3天低于对照组,第7天高于对照组且差异显著（P＜0.01）;C7和CFI在接种后第3天表达量高于对照组（P＜0.01）,但在第1、7天受到抑制;C4、C4A在接种第1天时表达量高于对照组,C4在第7天时表达量低于对照组（P＜0.01）;C5、C8G、MBL在接种后表达量均低于对照组。综上所述,有多种补体相关基因在鸡红细胞中存在表达,并且红细胞与大肠杆菌黏附后在短时间内激活了补体相关基因的表达。体内试验结果说明在鸡大肠杆菌病恢复期有利于经典途径的激活,凝集素途径可能在大肠杆菌感染时受到抑制而使早期免疫受阻引发大肠杆菌病,这为未来研究和防治禽大肠杆菌病提供了一个新的思路。
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