主要组织相容性复合体（Major histocompatibility complex, MHC），是由一群紧密连锁的基因群，定位于动物或人某对染色体的特定区域，呈高度多态性；其编码的分子表达于不同细胞表面，参与抗原递呈，制约细胞间相互识别及诱导免疫应答。MHC基因家族分为两个主要的亚族：即I类基因和II类基因。MHCII类分子的α、β链在内质网中与它的γ链聚合,形成九聚体。不同于α和β链的多态性，γ链为非多态性，被称为恒定链（Invariant chain, Ii）。Ii链是MHCII分子重要的伴侣蛋白分子，它在MHCII分子的正确折叠、组装、结构维持及表达蛋白和抗原呈递中起重要的作用。在后续研究中发现Ii链跨膜区与CLIP区N端相连的四个氨基酸序列（LRMK），与抗原表位连接后形成的嵌合体可以起到增强免疫应答的效果，同时LRMK也被称作Ii-key。本文研究了小鼠Ii链不同片段作为免疫载体在免疫应答中的作用。首先，通过登录GenBank数据库获得小鼠Ii链序列（登录号：NM₀01042605），对序列分析后依据划分的胞浆区、跨膜区、CLIP区、三聚化区分段设计多对引物，同时用实验室保存的F306（新城疫病毒的NDV F蛋白的嵌合串联表位），克隆重组含有F306的不同Ii片段的基因嵌合体，将不同片段分别插入到原核表达载体pGEX-4T-1、 pET-32a。经PCR鉴定和测序结果表明各个重组质粒均成功构建。其次，诱导表达10个融合蛋白，在表达条件优化处理后进行大量表达。大量表达的细菌经反复冻融和超声裂解处理后，提取融合蛋白，用改良的KCL染色切胶法纯化目的蛋白。经SDS-PAGE电泳检测，10个重组质粒均在大肠杆菌中正确表达，分子量分别为29.8KD、36.6KD、37.0KD、37.2KD、44.8KD、45.0KD、57.5KD、23.8KD、24.8KD、23.0KD，与理论预测结果一致。最后，用含有不同Ii片段载体F306抗原肽，免疫6～8周龄的雌性Balb/c小鼠，第三次免疫后经眼球采血，分离血清检测抗体。间接ELISA法优化条件后检测不同实验组抗体。检测结果表明，携带Ii-key和CLIP区尾部DN的抗原肽抗体效价分别是单独F306抗原肽的2倍和4倍，而增加胞浆区和跨膜区后抗体效价达到了单独F306的7倍。用抗原肽F306取代CLIP区Ii抗体效价仅是单独F306抗原肽的5倍。试验中所用的F306是NDV F蛋白三个抗原表位（F72、F161和F343）的串联嵌合体，分别单独检测这6组抗体，结果显示F72的抗体效价明显高于F161、F343，说明NDV F蛋白的优势抗原表位在66-92位氨基酸。综上所述，本文成功克隆了小鼠Ii链基于Ii-key的不同功能区基因片段，并与表位基因F306组成了嵌合体；各片段分别插入到原核质粒pGEX-4T-1、 pET-32a中，经表达后成功获得了目的基因的融合蛋白；多种蛋白经提纯后免疫Balb/c小鼠，测定抗体效价，分析了小鼠Ii链多种片段作为载体在免疫应答中的作用。为新型的恒定链活性片段载体疫苗的临床应用奠定了基础。