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目的:探讨邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯(mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP和邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)联合染毒致体外培养的小鼠睾丸间质细胞(TM3)氧化损伤及枸杞多糖对细胞的保护作用。 方法:1、将小鼠睾丸间质细胞(TM3)在含10%胎牛血清浓度的DMEM高糖培养基条件下体外培养,用浓度为0(对照组)、1、10、100、500、1000umol/L不同浓度梯度的MEHP和MBP作用于小鼠睾丸间质细胞48h。2、以MTT法测定细胞活力以及MEHP和MBP对细胞的毒性作用。3、比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)酶活力情况;用试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)含量。4、用试剂盒检测细胞线粒体内8-OHdG含量。5、用试剂盒检测细胞Caspase-3酶活力。6、Western blot检测细胞裂解液中Bax,Bcl-2的表达水平。 结果:1、MEHP和MBP联合染毒对TM3细胞的增殖抑制存在交互作用,使细胞存活率明显降低,表现为协同作用。2、MEHP和MBP单剂量染毒,随着染毒浓度的增加,细胞内的SOD水平明显降低;MEHP和MBP联合染毒组呈现协同作用。3、MEHP和MBP单剂量染毒,随着染毒浓度的增加,细胞内的MDA水平明显升高;MEHP和MBP联合染毒组呈现协同作用。4、荧光电镜结果显示,联合染毒组可见大部分细胞死亡,剩余细胞肿胀堆积、变暗,间隙更大。5、MEHP和MBP单剂量染毒,随着染毒浓度的增加,细胞内线粒体8-OHdG含量明显升高;MEHP和MBP联合染毒组呈现协同作用。6、MEHP和MBP联合染毒致细胞内Caspase-3活力增加,提示染毒诱导TM3细胞凋亡。7、细胞内蛋白水平Bax随着单剂量MEHP、MBP染毒浓度增加而增加;细胞内蛋白水平Bcl-2随着单剂量MEHP、MBP染毒浓度增加而降低。联合染毒组细胞与对照组比较,细胞内Bax蛋白水平增加,Bcl-2蛋白水平降低,显示细胞内促细胞凋亡的存在。而枸杞多糖保护组细胞凋亡与联合染毒组相比,细胞内Bax蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平增加。 结论:MEHP和MBP联合染毒对小鼠睾丸间质细胞的增殖有抑制作用,造成小鼠睾丸间质细胞发生氧化应激反应,主要表现为脂质过氧化水平的增高,同时降低细胞抗氧化水平,促凋亡蛋白表达水平升高,抑凋亡蛋白表达水平降低,诱导细胞凋亡。枸杞多糖对细胞有一定的抗氧化应激保护作用。