本文通过化学诱变的方法即用亚硝基胍(NTG)处理疣孢漆斑菌孢子,使其产生随机突变。通过96孔板高通量筛选的方法,筛选出了两株产耐热性能好的漆酶的菌株,命名为MF-01和MF-02,并对其及其产生的漆酶进行了生理指标检测,结果显示,两株突变株与未突变株比较发酵液中的酶活性,pH以及菌体生长量并没有突出变化,发酵液pH均为下降后上升,菌体生长量为线上升后下降。对两个菌株和未突变株的漆酶进行纯化,得到单一纯蛋白。MF-01的反应最适pH值为3.0,pH稳定性最好的时候在pH3.0-3.5。MF-02的反应最适pH值为4.0,pH稳定性最好时候在3.5-4.0,而未突变株的两值分别在pH4.5和pH4-5之间。说明两个突变株更耐酸性,稳定性更好。在热稳定性和最适温度的实验中,突变株MF-01在30-50℃时有相对较高的酶活,但MF-02与未突变株最适温度的差异不是十分明显。当温度上升至70-90℃,酶活均下降至50%以下,但MF-01的酶活性仍然高于MF-02和未突变菌株。同样在50%的相对酶活条件下,突变株漆酶放置的时间更长。经过分析,两株菌株产生的漆酶均有较好的稳定性,但其中一株MF-01的性能更加突出,并且能够稳定遗传,分析是突变剂使其产漆酶的基因序列发生了变化。为了验证这一猜想,实验用RACE的方法对未突变菌株的产漆酶基因进行了克隆,得到了产漆酶基因的编码区全部序列,并以此基因设计引物,对突变菌株的产漆酶基因编码区进行克隆,对两段基因对比发现,在编码区的第1522 bp左右的位置,有碱基发生了变,由GCT变成了GAT,致使其编码的氨基酸由丙氨酸变成了天冬氨酸,突变并没有对漆酶的铜中心造成结构变化。铜中心是一个相对保守的区域,活性中心的铜离子位点就位于这个由1个半胱氨酸和10个组氨酸残基构成的配体结构中。丙氨酸为中性氨基酸,而转变为天冬氨酸后,变成了带负电荷的酸性氨基酸,组氨酸属于带正电荷碱性氨基酸;分析这两种氨基酸可能产生了分子间作用力,使漆酶蛋白分子更加稳定,但漆酶不仅由氨基酸组成,还有糖基的参与,分析稳定性的变化还有可能是诱变使糖基化过程发生了某些变化,本文仅在漆酶基因水平上做了基础性研究。