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本试验以冷榨脱油后的欧李仁粕为原料,采用碱提酸沉法从中提取蛋白质,在此基础上,选用了7种食品级蛋白酶,分别对欧李仁蛋白质进行酶解,以水解度为指标初选出适合欧李仁蛋白水解的酶；对筛选出的酶进行单酶及多酶分步复合水解,通过比较不同酶解液对DPPH·自由基的清除能力来确定最佳的欧李仁肽制备工艺；利用正常小鼠及模型小鼠对欧李仁活性肽进行了体内的抗氧化和免疫调节作用的研究；利用葡聚糖凝胶Sephadex G-25层析法对制备的欧李仁肽进行分离纯化并收集各纯化组分,将对DPPH·自由基的清除能力最强的组分进行一级结构的鉴定。试验结果如下：1.欧李仁蛋白水解酶的筛选利用单因素实验,水解60min比较了7种蛋白酶在各自最适条件下对欧李仁蛋白的水解度,中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、酸性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和复合蛋白酶对欧李仁蛋白的水解度分别为15.5%、14.9%、13.7%、9.7%、7.8%、7.7%、9.2%。碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶的水解度都达到13%以上,为适合欧李仁蛋白水解的酶。2.欧李仁蛋白酶解方法的确定及欧李仁活性肽的制备对筛选出的三种酶分别进行单酶、双酶以及三酶协同分步水解,单酶水解：选用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶在各自最适条件分别水解30、60、90min测定其酶解液对DPPH自由基的清除率。结果表明,在30至60min内随着水解时间的延长,各酶解液对DPPH自由基的清除率逐渐上升。由碱性蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶,水解60min后的酶解液对DPPH自由基的清除率分别达到80.8%、79.6%和79.1%,之后三者延长至90min清除率变化不明显。双酶协同水解：先用碱性蛋白酶水解30min后,再用胰蛋白酶水解30min其酶解液对DPPH·自由基的清除率为82.4%,碱性蛋白酶与中性蛋白酶协同水解其酶解液的清除率为84.2%,中性蛋白酶与胰蛋白酶协同水解后其清除率为81.1%；三酶复合水解：将碱性蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶依次水解30min所得到酶解液对DPPH自由基的清除率高达93.4%。故得到三酶协同水解为最佳的酶解欧李仁蛋白制备活性肽的方法,按此方法水解欧李仁蛋白,收集酶解液,经灭酶、离心并浓缩后冷冻干燥即得欧李仁肽粉。3.欧李仁活性肽体内抗氧化作用的研究将欧李仁活性肽分为低、中、高即：10、20、30mg/mL三个剂量组分别灌胃小鼠30天后,测定其正常小鼠和模型鼠相关抗氧化指标并对各剂量组之间的差异性进行分析。欧李仁活性肽对正常小鼠体内抗氧化活性的影响研究发现：欧李仁活性肽对正常小鼠的体增重有提高的趋势,但作用不显著；高剂量组能够显著提高小鼠血清、肝脏和肾脏中SOD的活力(P<0.05)；高、中剂量组可显著提高小鼠血清、肝脏中GSH-PX的活性,但对提高肾脏中GSH-PX的活性的作用不显著；高、中剂量组还可显著降低小鼠血清、肝脏和肾脏中MDA的浓度,低剂量组还可显著降低肾脏中MDA浓度(P<0.05),对血清和肝脏中MDA浓度有降低的趋势,但作用不显著。欧李仁肽对模型鼠体内抗氧化活性的影响研究发现：高、中剂量组可显著提高模型鼠的体增重(P<0.05)；高、中、低剂量组都可显著提高模型鼠血清、肝脏中SOD的活力(P<0.05),低、中剂量组对肾脏中SOD活力有提高的趋势,但作用不显著；高、中剂量组可显著提高模型鼠血清、肝脏和肾脏中GSH-PX的活性；高、中剂量组还可显著降低模型鼠血清、肝脏和肾脏中MDA的浓度,低剂量组可显著降低肾脏中MDA浓度(P<0.05),对血清和肝脏中MDA浓度有降低的趋势,但作用不显著。4.欧李仁活性肽对小鼠体内免疫调节作用的研究以不同剂量的欧李仁活性肽灌胃小鼠,通过对小鼠的胸腺指数、脾脏指数、淋巴细胞增殖能力、血清溶血素、溶血空斑的形成和碳廓清能力等生化指标的检测,研究欧李仁活性肽对正常小鼠以及模型鼠的免疫调节作用。欧李仁活性肽对正常小鼠免疫功能的影响研究发现：高、中剂量组均可显著提高小鼠的胸腺指数和脾脏指数(P<0.05),低剂量组可显著提高小鼠的脾脏指数(P<0.05),但对提高胸腺指数的作用不显著；高、中、低剂量组均可显著提高小鼠的淋巴细胞的增殖能力,高、中剂量组还可显著促进小鼠的迟发型变态反应(P<0.05)；高、中剂量组均可显著提高小鼠血清溶血素和溶血空斑值(P<0.05)；高、中、低剂量组对正常小鼠的碳廓清指数有提高的趋势,但作用不显著。欧李仁肽对模型鼠免疫功能的影响研究发现：欧李仁活性肽高、中、低剂量组均可显著提高小鼠的胸腺指数和脾脏指数(P<0.05)；高、中、低剂量组均可显著促进模型鼠的迟发型变态反应(P<0.05),但低剂量组对提高模型鼠的淋巴细胞的增殖能力不显著；高、中、低剂量组对模型鼠血清溶血素值有提高的趋势,但作用不显著,高剂量组可显著提高模型鼠的溶血空斑值(P<0.05)；中剂量组还可显著提高模型鼠的碳廓清指数(P<0.05)。5.欧李仁活性肽的分离纯化及结构测定经葡聚糖凝胶Sephadex G-25层析法获得的欧李仁肽主要有四个组分,在相同浓度下(2mg/ml)第Ⅳ个组分对DPPH自由基的清除能力最强,其清除率可达95.6%。经质谱鉴定此组分由两个肽片段组成,其氨基酸组成分别为Leu-Ala-Thr-Ala-Pro-Ser-Arg和Leu-Asp-Gln-Val-Pro-Arg。