柯里拉京对胶质瘤U251细胞及其干细胞凋亡与化疗耐药的影响

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目的:探讨柯里拉京(Corilagin)对胶质瘤U251细胞和U251干细胞细胞凋亡和耐药基因ABCG2的作用,确定其对胶质瘤U251细胞迁移能力的影响。方法:培养U251细胞及其干细胞并进行传代,Nestin染色进行U251干细胞鉴定,通过不同浓度(50-200μg/ml)的Corilagin进行干预后,在24h、48h、72h时,采用荧光倒置显微镜观察细胞形态变化,利用流式细胞技术检测细胞凋亡情况,使用RT-PCR技术对ABCG2mRNA的表达强度进行检测,利用划痕实验和Transwell实验检测U251细胞的迁移能力。结果:1.未经过柯里拉京干预的U251细胞生长状态较好,细胞贴壁生长,铺满培养瓶瓶底,其细胞结构完整,胞体呈多角形。随着培养时间的逐渐延长,细胞数量和密度逐渐增加。柯里拉京干预后,U251细胞体积变小且密度降低,细胞碎片增加,随着药物干预浓度的增加及干预时间的延长,该变化更加明显。2.未经过柯里拉京干预的U251干细胞呈球形或椭圆形,状态良好,呈悬浮生长,随着培养时间的逐渐延长,细胞球数量和密度逐渐增加。U251干细胞经柯里拉京干预后细胞球数量和密度降低,细胞球发生裂解,同时可见大量细胞碎片悬浮散于培养基中,随着药物浓度的增加及干预时间的延长,该变化更加明显。3.柯里拉京干预U251细胞及其干细胞后,在干预的相同时间点,随着药物浓度的增加,两种细胞的凋亡率逐渐上调,当药物浓度为100μg/ml时凋亡率则趋于稳定。在干预浓度相同的情况下,随着药物干预时间的延长,两种细胞的凋亡率逐渐增加。在相同干预时间及干预浓度条件下,U251干细胞的凋亡率高于U251细胞(P<0.05)。4.柯里拉京干预U251细胞及其干细胞后,在干预的相同时间点,随着药物浓度的增加,两种细胞ABCG2的mRNA表达量逐渐上调。在相同干预浓度情况下,随着药物干预时间的延长,两种细胞ABCG2的mRNA表达量逐渐增加。在相同干预时间及干预浓度条件下,U251干细胞中ABCG2的mRNA表达量高于U251细胞(P<0.05)。5.划痕试验的结果显示,与未经药物干预的U251细胞相比,柯里拉京干预在24h-72h能明显降低U251细胞的迁移度,随着药物干预时间的延长,细胞的迁移度降低越明显(P<0.05)。6.Transwell实验的结果显示,在柯里拉京干预后24h,穿过小室底膜的细胞数量逐渐减少(P<0.05)。结论:柯里拉京能够诱导胶质瘤U251细胞及其干细胞发生凋亡,促进耐药基因ABCG2的表达,而且柯里拉京对胶质瘤U251干细胞较胶质瘤U251细胞能够产生更强的诱导细胞凋亡和促进耐药基因表达的作用。同时,柯里拉京能有效抑制胶质瘤U251细胞的迁移。
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