对凉血止血类中药抗新生血管生成作用的斑马鱼筛选实验

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:haixinmei
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目的:  抗肿瘤新生血管治疗肿瘤已经得到现代医学的认可,医疗界在治疗肿瘤该领域求新求变,力求研发出新的肿瘤药物。  而中药抗肿瘤新生血管治疗肿瘤已经得到证实,在中医治疗肿瘤的各种理论上,肿瘤在八纲辨证属于里证、实证,在卫气营血辨证属于血分证,叶天士说“在卫汗之可以;到气才可清气;入营尤可透热转气;入血就恐耗血动血,直须凉血散血;”。而临床凉血止血药在肿瘤患者后期发热的治疗中也是常用药物。所以,对于凉血止血类药物在抗血管新生方面作用值得进一步研究。在该实验组中,选取五种凉血止血类药物来研究其抗血管生成的作用。分别为:大蓟、小蓟、地榆、侧伯叶、白茅根。已有相关研究表明,上述五种药物具有抗肿瘤的作用。而以斑马鱼为模型的抗血管新生方面研究不足。本实验以TG品系的fli1a-EGFP转基因斑马鱼为模型,利用其绿色荧光蛋白显影特质,在显微镜下观察中药水提物成分对斑马鱼体内血管生成的抑制效果,并且,借此进一步筛选具有抗新生血管作用的中药。  方法:  选用TG品系的fli1a-EGFP转基因斑马鱼为生物模型。将新鲜配置好的中药提取物(工作浓度:200μg/ml)(分别为:大蓟、小蓟、地榆、炒侧伯叶、白茅根)和阳性对照药物-PTK787(5μg/ml)处理受精后22小时(22hpf)的斑马鱼胚胎直至48hpf。每个样品处理30只斑马鱼胚胎,在12孔板(Falcon)中实验。药物处理实验结束后,将各组将各药物浓度处理后的胚胎在体式荧光显微镜(Nikon SMZ-1500体式荧光显微镜)下进行血管表型观察和拍照,拍照时相为48hpf,以分析各个样品对斑马鱼体节间血管(ISV)生成的影响。完整的体节间血管(ISV)是衡量斑马鱼血管新生(angiogenesis)的重要指标。完整的ISV是指:连接背主动脉(DA)和背长轴血管(DLAV)之间的那一段血管。在血管筛选实验中,同时对各个样品诱导的斑马鱼发育毒性和死亡也进行观察和统计。  结果:  炒侧伯叶、白茅根具有抑制斑马鱼新生血管生成的作用,大蓟、小蓟不具有抑制斑马鱼新生血管血管的作用。地榆、炒侧伯叶、白茅根水提取均表现出导致斑马鱼死亡现象。  结论:  实验中,炒侧伯叶、白茅根水提物在TG品系fli1a-EGFP转基因斑马鱼生物模型上具有抑制新生血管的作用,地榆水提物对斑马鱼胚胎有100%致死毒性,炒侧伯叶有20%致死毒性,白茅根有10%致死毒性,大蓟、小蓟水提物对斑马鱼胚胎无致死、致畸。
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