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前言 青光眼(Glaucoma)视网膜神经节细胞(Retinal ganglion cells,RGCs)的死亡方式是细胞凋亡(Apoptosis),这一观点是Quigley于1995年发现并提出的。抑制视网膜神经节细胞凋亡是青光眼视神经保护的关键。有研究表明,一氧化氮(Nitric oxide,NO)密切参与青光眼视网膜缺血再灌注损伤时RGCs的凋亡。另外,caspase-3是验证细胞是否通过凋亡途径死亡的可靠依据。氨基胍(Aminoguanidine,AG)是诱导型一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)的相对特异性抑制剂。本研究的目的是探讨氨基胍在实验性高眼压视网膜缺血再灌注损伤模型中对视网膜超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(NO)水平及caspase-3表达的影响。 实验材料与方法 应用健康成年Wistar大白鼠54只,体重180-220g,无眼疾,雌雄均有,随机分为3组,即对照组、缺血再灌注组、给药组。每组又分为6h、24h、72h三个小组,每小组6只。将Wistar大白鼠予3%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射,完全麻醉后双眼局部滴1%地卡因,将连接生理盐水瓶的5号针头沿颞侧角膜缘刺入鼠的前房,然后升高输液瓶至与动物眼部垂直距离为136厘米处,此高度可在眼内形成100mmHg的眼压。缺血60分钟后将针头取出,恢复视网膜血流灌注。此时腹膜腔内注射氨基胍溶液(给药组)/或等量生理盐水(缺血再灌注组),对照组进行前房穿刺后不予升高眼压。分别于缺血再灌注后6h在4h*2h采用颈脱臼的方法处死大白鼠,迅速摘除眼球。每小组中取6只眼用于caspase-3的免疫组织化学研究;另外6只眼剥离视网膜,测定视网膜组织中SOD。MDA以及NO的含量。 结 果 *SOD、MDA水平的改变 在缺血组,视网膜*OD水平在6h最低门<O.O门,随时间进行性升高至与对照组相似水平;**A水平在6h最高河<O.O门,随时间进行性降低至与对照组相似水平。 在给药组,SOD水平在 6h明显高于缺血组评<0.0 厂 MDA水平在6h明显低于缺血组(P<O.O*,其余各时间点,两者水平与对照组相似。 2.NO水平的改变 在缺血组,视网膜内*O水平在6h最高河<0.01X随后下降,在24h接近正常水平,72h回到正常水平。 在给药组,*O水平在6h较缺血组明显降低河<O.0门,其余各时间点接近正常水平。 3.Caspase-3的表达 在对照组,大鼠视网膜基本无casPase-3阳性细胞表达。 而在缺血组,caspase-3阳性细胞主要在大鼠视网膜节细胞层、内丛状层和内核层内侧表达。阳性物质位于胞质,分布不均,呈棕色或浅棕色显色。6h阳性细胞数较对照组明显增多订<O.01人随时间进行性减少,但各时间点阳性细胞数较对照组仍有差异(P<0.山)。 在给药组,6h和24h阳性细胞数较缺血组明显减少u<O.01厂 72h阳性细胞数较同时间点缺血组少汗<0.05人 ·2· 与对照组相比,给药组阳性细胞数仍高,在6h时差异显著瞩<O.01),在24h和72h时有差异(P<O.05)。 讨 论 在鼠视网膜缺血再灌注损伤模型中,短暂提高眼内压造成的视网膜变性提示在视网膜节细胞层和内核细胞层存在大量的神经元素的丢失。这些特征与视网膜缺血刺激和急性青光眼的改变是很相似的。首先在动物试验中证实青光眼中部分视网膜神经节细胞通过凋亡机制死亡,随后又证实了在人类青光眼中亦有细胞凋亡现象。 视网膜缺血再灌注损伤的两大机理是能量代谢障碍和氧自由基的大量生成。氧自由基能促进脂质过氧化,造成细胞膜功能与结构降解,导致细胞凋亡。氧自由基的大量生成,氧化SOD,使SOD含量迅速下降,所以SOD水平高低可反应组织中氧自由基的含量。MDA反应组织中脂质过氧化程度。在本研究中,SOD在视网膜缺血再灌注早期组织中含量低,随着时间而上升达到正常水平,MDA的变化趋势与SOD相反。反应缺血时组织中氧自由基的含量增大,消耗大量mD产生过量MDA。而在给药组断D和MDA的变化不明显,组织中两者的含量与对照组相似,说明氨基肥有抑制氧自由基生成的作用。 一氧化氮(NO)是大气的一种组成成分,是无机小分子气体,是一种细胞信使分子和细胞毒性因子,能介导谷氨酸的细胞毒性作用。已知一氧化氮合成酶(Nitric oxide synthase,NOS)有三种异构体:神经元型 NOS(NO*-I),内皮型 NOS(NOS一皿)和诱导@ NOS州OS-n八 iNO53与炎症、免疫反应紧密相联,一旦被激活,只要刺激因子不消除JO就持续不断地产生。NO作为氧自由基,含量增多,可以和超氧离子O厂反应生成毒性很强的超氧 ·3·亚硝酸根离子(ONOO刁,进而损伤线粒体电子传递系统。ONOO一是一种强氧化剂能氧化蛋白质的疏基,使多种酶失活,并且可使蛋白质降解J质过氧化,从而严重影响生物膜的功能,促进细胞凋亡。 氨基肌(AG)具有选择性抑制iNOS的?