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促性腺激素释放激素(GnRH),是一种神经、免疫、内分泌三大调节系统互相联系的重要的信息分子。下丘脑GnRH和性腺激素能够通过它们在垂体上的受体(即雄激素受体(AR)、雌激素受体(ERs)和GnRH-R)调节垂体激素的周期性释放和垂体的发育。在绵羊胚胎发育期和性成熟前,AR、GnRH-R的在垂体的表达变化还未见报道。我们前期工作已证明了ERa在胎羊垂体发育中表达变化规律。本论文以胎羊和羔羊垂体为材料用原位杂交、免疫组化、RT-PCR等方法来研究AR、ERa、GnRH-R在垂体发育中表达变化及其相互关系。取得了以下几个方面研究结果。
1.用免疫组化方法首次研究了妊娠60d,90d,120d的胎羊和羔羊(新生,2~7月龄)垂体中AR表达情况。结果表明:AR免疫阳性反应(AR-ir)定位在细胞核, 13.51%~17.05%胎羊垂体细胞表达AR-ir,AR-ir无明显性别差异。在雄性羔羊垂体中,AR表达呈现出明显的变化,3月龄时阳性比例最高(19.86±1.03%),到6月龄显著降低至最低水平,8.18±1.17%(P<0.05)。AR-ir主要在促性腺激素细胞和促乳素细胞。LH和AR双染细胞占AR-ir细胞的比例,由妊娠60d时到新生明显升高(P<0.05)。这些结果表明AR对于胎羊的腺垂体促性腺激素细胞和促乳素细胞的功能有重要作用。
2.首次研究了胎羊和新生羔羊垂体中AR与ERa的共表达情况。结果表明:AR-ir和ERa-ir主要在促性腺细胞核内表达。双染细胞比例随妊娠日龄明显升高(P0.05)。这些结果表明AR和ERa与胎羊腺垂体促性腺细胞功能有密切关系。
3.用免疫组化方法首次研究了2~7月龄羔羊垂体中ERa的表达情况。在2~7月龄,有8.79±0.02%~11.80±0.04%的垂体细胞表达ERa,在6月龄时表达水平最低。垂体中AR和.ERa在性成熟期表达最少,这一规律变化可能有助于垂体对性腺功能的调控。
4.用原位杂交和R1-PCR方法研究了小尾寒羊垂体中GnRH-R mRNA的表达变化。结果表明:GnRH-R在垂体中呈团索状散在分布在整个垂体。GnRH-R主要在生长激素细胞、促性腺激素细胞和促乳素细胞表达。从妊娠60d,胎羊垂体中已有GnRH-R mRNA的表达,随妊娠日龄增加,表达量显著升高,到妊娠120d时有一高峰。垂体中GnRH受体mRNA和性腺激素受体的共表达研究结果表明:GnRH-R mRNA的原位杂交显色的阳性部位在胞质,AR和ERa的免疫组化阳性部位在胞核。GnRH-R和AR、ERa存在一定比例的双染。这提示性腺激素和GnRH在垂体中存在一定的相互作用。