【摘 要】
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目的:通过左旋聚乳酸(Poly L-lactic acid,PLLA)/聚多巴胺(PDA)涂层/骨形态发生蛋白--2(BMP-2)/血管内皮生长因子(VEGF)制备成一种新型组织工程骨膜,并对这种人工骨膜适合人
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目的:通过左旋聚乳酸(Poly L-lactic acid,PLLA)/聚多巴胺(PDA)涂层/骨形态发生蛋白--2(BMP-2)/血管内皮生长因子(VEGF)制备成一种新型组织工程骨膜,并对这种人工骨膜适合人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)黏附增殖并且促进其分化成骨的能力进行评估。方法:使用自组装静电纺丝装置制备PLLA纳米纤维膜。将PLLA膜与PDA在弱碱性溶液中反应在PLLA膜表面构建PDA涂层。然后将PDA/PLLA膜浸入目标浓度的BMP-2溶液及VEGF溶液中室温下震荡过夜,得到BMP-2/VEGF/PDA/PLLA膜。通过扫描电镜(SEM)、免疫荧光法检测其表征;通过酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对其释放BMP-2和VEGF的能力进行评估;通过实时定量聚合酶链式反应(Real Time quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR),蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)实验,茜红素染色对其诱导成骨分化能力进行检测。通过体外细胞培养使用细胞免疫荧光法和MTS对其细胞相容性和细胞毒性检测。体内实验通过构建骨缺损模型原位植入材料,通过Micro CT检测其成骨情况。结果:我们成功制备出BMP-2/VEGF/PDA/PLLA膜,并且具有缓释BMP-2和VEGF的功能。所制备的人工骨膜无细胞毒性且具有良好的细胞相容性和诱导成骨分化作用。体外实验的结果证明了其具有良好的成骨作用。结论:静电纺丝法制备的PLLA膜具有良好的微观结构,可以作为骨膜组织工程的支架,PDA涂层可以帮助PLLA膜装载VEGF和BMP-2,且能提高PLLA膜的亲水性以利于hBM-MSCs黏附增殖。制备得到的人工仿生骨膜具有良好的诱导成骨作用,在VEGF和BMP-2的协同作用下具有更好的成骨效果。
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