论文部分内容阅读
第一部分小鼠脑发育过程中SGT蛋白的表达研究SGT(small glutamine-rich tetratricopeptide repeat(TPR)-containing protein)是含有TPR基序的蛋白家族中的一种新的细胞性蛋白分子,有文献报道,SGT能够作为一种共分子伴侣蛋白分子和促凋亡因子而发挥重要功能。SGT蛋白结构中含有三个串联的TPR结构域,每一个TPR基序都是由34个氨基酸序列组成。含有TPR结构域的蛋白分子能够参与介导一系列的生物学活动,这其中包括细胞周期调控,转录抑制,线粒体和过氧化物蛋白转运以及神经发生等。有研究显示,SGT能够通过和Hse70(热休克同源蛋白70)以及CSP(半胱氨酸链蛋白)在突触囊泡的表面形成一种三元复合物而可能对神经递质的释放机制产生一定的影响,但SGT蛋白在小鼠脑发育过程中的表达以及该蛋白对于脑发育的影响还未曾报道。
在本次实验研究中,我们以从孕17天(E17)开始到成年期10周(10W)整个发育阶段的小鼠全脑以及从出生后到成年(1W到8W)的海马、皮层、小脑和纹状体作为样本,采用real-time PCR、Western blot以及免疫组化等实验方法,研究了SGT蛋白在相应发育阶段的表达情况。实验数据显示,SGT的蛋白水平在孕晚期直至出生后一段时期较高,从4W开始至成年,表达水平呈现下降趋势。SGT的mRNA在整个发育阶段的变化趋势与蛋白相似。SGT蛋白在海马、皮层、小脑和纹状体这四个脑分区中的表达情况基本与全脑中的表达模式类似。免疫组化技术分析了SGT蛋白的亚细胞定位,发现SGT在海马的CA1-3区域表达较高。在皮层和纹状体的大部分神经元中都能检测到SGT的阳性染色,在小脑中,SGT主要分布在浦肯野(氏)细胞中。
SGT蛋白在小鼠脑发育过程中的表达模式提示SGT可能对于小鼠的脑中枢神经系统的发育产生一定的影响。
第二部分运用酵母双杂交技术确定与DC-SIGN相互作用的蛋白分子DC-SIGN(一种树突状细胞特异性的ICAM-3抓连非整合素类蛋白)是树突状细胞的一种粘附性受体分子,同时又作为Ⅱ型跨膜蛋白且能与甘露糖结合的C型凝集素而存在。DC-SIGN的C端,即胞外段含有一个能够识别糖链结构的CRD结构域。有文献报道,DC-SIGN对于树突状细胞的诸多功能的实现发挥着重要的作用,这其中就包括通过细胞间粘附分子3(ICAM-3)介导与T淋巴细胞的相互作用,以及作为一种滚动受体分子来介导细胞间粘附分子2(ICAM-2)依赖的迁移过程。DC-SIGN与DC-SIGN受体二者既能够在靶细胞内通过浓缩病毒分子的方式,也能够在胞外通过定位或者转运病毒于靶细胞的方式来完成这种受体配体间的相互作用。许多研究显示,DC-SIGN能够与大范围的病原生物体相互结合而参与微生物的识别与感染途径。最近有研究发现,DC-SIGN与丙型肝炎病毒具有很高的亲和性。在抗原递呈过程中,DC-SIGN与丙型肝炎病毒结构中的E2蛋白分子的相互作用会对树突状细胞与T淋巴细胞的结合产生不利的影响。也就是说,DC-SIGN能够为HCV病毒侵入树突状细胞创造有利条件。因此,针对DC-SIGN的这种生物学特性专门设计的临床治疗方案,对于阻止丙型肝炎病毒的蔓延,深入了解发病机制以及有针对性地引导DC-SIGN的迁移来达到有效控制自身免疫应答反应和肿瘤发生的诱因是具有重大意义的。
为了进一步阐明DC-SIGN的功能特性,我们运用酵母双杂交技术以DC-SIGN作为诱饵蛋白筛选人胸腺cDNA文库,获得了阳性目的蛋白分子Tollip和saposinD,分别是TLR通路中的抑制性衔接蛋白分子和参与神经鞘脂类代谢的一种热稳定性蛋白,对于进一步揭示DC-SIGN的功能具有一定的参考价值。