血管性痴呆(Vasular dementia,VD)是指脑血管病变导致脑损害引起的痴呆,以记忆、注意、语言和执行功能等高级认知功能障碍主要为临床表现。VD是导致老年期痴呆的第2位原因,发病仅次于阿尔茨海默病。在我国VD而且发病率逐年上升。给家庭和社会带来了沉重的负担。现代医学对VD具体发病机制尚不清楚于,缺乏有效的治疗措施,而中医药在VD的预防和治疗中显示出优越性。扶阳学派远绍《黄帝内经》重阳思想,极为重视阳气在人体生理与病理的作用。其理论核心为阳主阴从观,其治疗遵循“病在阳者,扶阳抑阴;病在阴者,用阳化阴”的法则。扶阳学派唐农教授提出温肺降浊法治疗VD,经试验和临床的验证已经展现出良好的前景。最新研究表明与神经细胞凋亡和神经营养因子共同参与了VD的病理生理进程,并与神经营养因子通路(BDNF/TrKb-P38/MAPKAPK2-CREB)关系密切。因此,本课题通过复制VD大鼠模型,Morris水迷宫实验检测大鼠记忆学习的影响,采用HE染色,TUNEL法和电镜观察CA1区神经细胞的凋亡,采用免疫组化、RT-PCR、Western Blot检测神经营养因子通路(BDNF/TrKb-P38/MAPKAPK2-CREB)通路相关基因和蛋白表达,以探讨温肺降浊方干预VD的效应机制。为此,本文从两个方面开展了研究。1.中医理论研究首先就中医经典著作以及历代医家经典对VD的认识,中医药治疗VD的研究现状进行了分析。其次,细致梳理了中医扶阳学派的传承脉络,并且基于中医经典著作,依据唐农教授提出人体阴阳的本体结构理论,对扶阳学派的核心理论与方法进行还原性阐释。揭示人体阴阳的本体结构,从《周易》泰否二卦形象的解释了阴阳的本体结构,理清阴阳之体与用,阐发阳主阴从观深刻内涵与外延,解读了人体的自愈机制,联系实践细致分析了扶阳基本治则(病在阳者,扶阳抑阴;病在阴者,用阳化阴)与中土的密切关系,阐明了《伤寒论》三阴病的虚寒本质与治则。最后在扶阳学派的理法上,提出了VD属于三阴病,其病机之本为元阳虚衰、神机失用,病机之标为肺失宣降,痰浊瘀血阻滞脑络。据此提出温肺降浊方,按照VD病机标本,依据次第而治疗,并附临床医案一则。2.实验研究目的:建立vd大鼠模型,观察温肺降浊方干预vd大鼠记忆学习能力与海马病理学以及神经营养因子通路(bdnf/trkb-p38/mapkapk2-creb)的影响,探讨温肺降浊方干预vd的机制。方法:(1)健康雄性spf级sd大鼠,适应性喂养后采用morris水迷宫实验剔除极值。将实验大鼠随机分为空白组与造模组,采用双侧颈总动脉夹闭再灌注法制造模。待大鼠手术切口愈合,进行第二次morris水迷宫实验筛选造模成功的大鼠,随机分为模型组、中药低中高、西药5个组,连续灌药28天,进行第三次morris水迷宫实验,然后取材。(2)采用he染色,tunel法和电镜的方法观察神经元组织形态学的变化,判断温肺降浊方对vd大鼠海马病理学的影响。(3)采用免疫组化、rt-pcr、westernblot检测神经营养因子通路(bdnf/trkb-p38/mapkapk2-creb)通路相关基因和蛋白表达,判断温肺降浊方对此通路的影响。结果:(1)在morris水迷宫实验中,模型组大鼠的学习与记忆能力明显受到损害;而使用温肺降浊方干预后,大鼠的学习、记忆能力有显著的改善;且中药高剂量组的治疗作用最为显著(p<0.05)。(2)he染色,tunel法和电镜结果显示,相较于模型组,温肺降浊方各组大鼠海马神经元组织形态均得到不同程度的改善;且中药高剂量组的治疗作用最为显著。(3)免疫组化、rt-pcr、westernblot结果显示,相较于模型组,温肺降浊方各组大鼠海马ca1区bdnf、trkb与creb蛋白和mrna表达提高,p38与mapkapk2蛋白与mrna表达降低;且中药高剂量组的治疗作用最为显著(p<0.05)。结论:结果表明:温肺降浊方对vd大鼠的学习记忆能力有显著的改善作用。其防治血管性痴呆,可能通过双重机制调节神经细胞存活:BDNF磷酸化诱导p38/MAPKAPK2信号通路并抑制其促凋亡功能;以CREB的方式诱导促存活基因的表达。反过来,神经元的活动又可通过CREB依赖性的机制诱导BDNF的表达,在BDNF和CREB之间形成了循环通路。