肺癌(lung cancer, LC)是全球最常见的恶性程度较高的原发性肿瘤。据世界卫生组织的统计资料显示,2012年全世界新增癌症患者大约有1410万例,其中肺癌患者有180万人,占癌症新增病例的13%。肺癌是全球男性癌症中发病率和死亡率最高、也是发达国家女性癌症死亡率最高的疾病。在云南宣威、富源等地,肺癌的发病率在全国所有城市中排在首位,并具有女性的发病率远远高于男性的特点。而针对宣威肺癌发病原因的大量研究结果显示,导致肺癌高发的环境原因主要是使用当地出产的烟煤所造成的室内空气以及大气污染,其中包含主要的环境致癌物多环芳烃。由于环境污染的加剧和人口的快速增长以及老龄化等因素的作用,加之临床缺乏有效的肺癌早期诊断的生物标志物,使得大多数肺癌患者在确诊时已是中晚期。进而导致肺癌的发病率和死亡率仍在逐年增加,其五年生存率已不足17%。因此,开发有效的早期诊断的生物标志物对于肺癌的早发现早治疗至关重要,是改善肺癌预后和提高生存率的关键。研究表明,人类肿瘤的发生和发展与异常的DNA甲基化具有显著的相关性,并且肿瘤相关基因的甲基化异常现象在细胞癌变之前就已经发生了,能够作为很好的肿瘤筛查和早期诊断的标志物；而研究环境致癌物在肺癌发生发展中的作用,并寻找有效机体损伤的标志物,对于肺癌的预防和监测具有重要的意义。本课题选择了RASSF1A和TBX5两个抑癌基因作为肺癌甲基化异常的标志物研究它们和肺癌之间的关系,并对BPDE-DNA加合物在肺癌中的分布和含量进行检测,探索DNA加合物和DNA甲基化与肺癌的相关性,以期为寻找肺癌早期诊断的甲基化标志物和环境污染对人体的损伤的标记提供理论支持。本研究收集了23例云南肺癌的手术组织样本,其中有9例患者来自于宣威等肺癌高危地区。统计分析发现,男性肺癌患者远高于女性患者,且高危地区的肺癌患者年龄与其他地区相比具有年轻化的趋势,但无明显统计学差异。其次,通过重亚硫酸盐测序对云南肺癌中的RASSF1A和TBX5基因的甲基化水平进行检测。结果显示,所有肺癌样本中有8例患者出现了RASSF1A基因的高甲基化水平,14例患者表现为TBX5基因的高甲基化水平,分别占总肺癌患者数量的34.78%和60.87%。另外,与癌旁组织相比,RASSF1A和TBX5基因在肺癌组织中具有较高的甲基化水平,统计学分析具有显著性差异(P<0.001和P<0.005),并且两个基因的甲基化水平具有一定的关系(R2=0.65),尤其在一例小细胞肺癌中两个基因同时表现为高度甲基化。最后,肺癌患者临床特征的关联性分析显示,RASSFIA和TBX5基因的甲基化水平在男性肺癌患者中高于女性患者,其中TBX5基因在不同性别肺癌患者中的甲基化水平具有显著性差异(P=0.021)。两个基因的甲基化和肺癌患者的年龄未发现具有相关性。此外,肺癌早期患者的RASSFIA和TBX5基因的甲基化水平和不同的临床分期具有一定的正相关趋势,但各分期组之间的甲基化水平的差异不具有显著性(P>0.1)。另一方面,利用免疫荧光对肺癌组织中的BPDE-DNA加合物进行定位和半含量分析。结果显示,BPDE-DNA加合物在肺组织细胞的胞核和胞浆中都有表达,主要分布在肺支气管粘膜表层和肺泡周围。另夕,BPDE-DNA加合物在增殖中的肺癌细胞中也有表达,说明能够随着癌细胞分裂增殖而复制遗传。结合肺癌患者的临床特征分析显示,BPDE-DNA加合物含量在不同性别的患者肺癌组织中无显著性差异,50到70岁的肺癌患者高于其他年龄段,在ⅠA期到ⅡA期的肺癌患者中表现为递增的趋势,在ⅠA和ⅠB期肺癌患者之间具有差异性,但差异不显著(P=0.093),而在ⅠA和Ⅱ A期肺癌之间具有显著性差异(P=0.017),说明该加合物和早期肺癌的临床分期具有一定的相关性。最后,肺癌中BPDE-DNA加合物的含量和DNA甲基化水平之间的相关性分析显示,RASSFIA基因的甲基化水平和BPDE-DNA加合物的含量无相关性,而TBX5基因甲基化水平随着BPDE-DNA加合物的水平的增加而逐渐上升,表现为一定的正关联性(P=0.018)。综上所述,RASSF1A和TBX5基因的高甲基化能够作为肺癌或肺癌早期诊断的潜在标志,而BPDE-DNA加合物的含量能够反映早期肺癌的恶性程度。TBX5基因的甲基化水平能够在肺癌早期反映BPDE-DNA的剂量,可作为多环芳烃的损伤效应的潜在标志物。