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目的:中国洛阳作为亚洲重要钼矿开采地,富含大量钼元素的土壤会对当地的牧草、家畜产生一定的影响,并且通过食物链的富集作用引起动物Mo中毒,因此研究Mo对动物的影响就显得尤为必要。钼作为动物体必需的微量元素,在动物机体的生长和代谢过程中发挥着重要的作用。机体摄入过量的钼可导致钼中毒的发生,从而对动物体的免疫功能、泌尿功能和生殖功能等造成损伤。目前,国内外关于钼中毒的研究主要集中于动物体的免疫和生殖系统的研究,而关于 Mo对体外培养小鼠骨骼肌细胞(SMC)和肾小管上皮细胞(RTEC)的毒性影响却未见报道。 方法:本试验选用3日龄健康小鼠,无菌取出小鼠肾脏和骨骼肌组织进行原代细胞培养,待细胞生长稳定后,向细胞添加含Mo无血清培养基培养24 h, Mo的最终浓度分别为0、0.1、0.2、0.4、0.8 mmol/L。倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定 Mo对细胞活力的影响;用试剂盒测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC),同时测定培养基内乳酸脱氢酶(LDH)含量;采用实时荧光定量 PCR技术,对骨架蛋白α-肌动蛋白(α-actin)、β-肌动蛋白(β-actin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA的表达进行测定;采用免疫印记技术(Western Blot),对骨架蛋白α-actin、β-actin和 Vimentin蛋白含量的变化进行测定。 结果:1.通过细胞形态观察得出,当细胞培养基中钼浓度为0.4、0.8 mmol/L时会导致小鼠肾小管上皮细胞间隙增大,且细胞生长紧缩且细长,轮廓逐渐模糊,少数细胞出现畸形;当细胞培养基中 Mo浓度为0.2、0.4、0.8 mmol/L时会导致小鼠骨骼肌细胞生长缓慢,细胞间隙增大,且细胞形状随 Mo浓度的升高,细胞凸起、轮廓明显,并有少量细胞出现畸形。 2.细胞培养基中钼浓度为0.8mmol/L时,小鼠肾小管上皮细胞和骨骼肌细胞的活力明显受到抑制。 2.细胞培养基中钼浓度为0.4、0.8mmol/L时,可以引起小鼠肾小管上皮细胞和骨骼肌细胞的抗氧化能力下降,受到氧化损伤。 3.细胞培养基中钼浓度为0.8mmol/L时,原代小鼠肾小管上皮细胞和骨骼肌细胞骨架蛋白α-actin,β-actin,Vimentin mRNA和蛋白合成受到抑制。 结论:本试验从细胞形态学、氧化损伤和细胞骨架损伤方面,初步探讨了钼中毒对于骨骼肌细胞和肾小管上皮细胞的损伤机理,证实了高剂量的 Mo能够引起小鼠肾小管上皮细胞和骨骼肌细胞氧化损伤和细胞骨架蛋白合成受到抑制,影响二者正常生理功能。