wg/Wnt信号在心脏发育和心脏衰老过程中发挥重要的作用。pygo作为Wnt信号途径的一个新成员,依赖于Wnt信号调控心脏发育。本研究室的最新结果表明,敲低pygo表达导致严重的成体心脏功能突变表型,而敲低Wnt/β-catenen-TCF信号成员的表达导致的突变表型,明显低于pygo的表型水平或无表型。另一方面,TCF的显性负突变引起与pygo表型一致的严重成体心脏生理功能缺陷,提示pygo调控成体心脏功能不依赖于经典Wnt信号,可能依赖与TCF类似因子相互作用而发挥功能,存在新的调控机制。因此,利用果蝇心衰模型,探究新型的pygo分子调控途径成为了我们的研究重点。为了探究pygo在果蝇成体心脏中的分子调控机制,本文采用了染色质免疫共沉淀结合高通量测序(ChIP-seq)的方法鉴定pygo基因调控成体心脏功能的新靶点,首先,运用成体心脏功能分析系统验证了pygo在维持成体心脏功能中的重要功能。其次通过果蝇杂交实验构建了心脏特异性(hand 4.2 Gal4)驱动UAS-HA-pygo过表达标签稳定系,采用免疫荧光实验方法证明了HA抗体的有效性,检测到Pygo蛋白在心管的表达。同时,剥取过表达果蝇品系心管,用甲醛交联,并用超声波将其打断成一定长度的小片段,取一部分染色质作为Input,其余分别加特异性HA抗体,以及阴性对照IgG抗体,解交联,纯化DNA,最后对文库DNA进行验证、质检、高通量测序。测序后对结果进行多方面处理,去污染及接头、将测序转化为可视化数据;通过MACS方法追踪到799个重要基因组特征峰值,并对其基因结构进行了分类,使用最新的UCSC浏览器对数据进行结构和功能注释;对峰值信号进行GO富集聚类分析,Pygo相互作用基因的功能主要定位在染色体结构变化和修饰过程中;分析转录起始位点TSS附近的峰值分布特征并对三个重复样品进行启动子峰值交叉分析,找到120多个代表基因;并对三个重复样品进行信号通路分析,定位到11条重要的信号通路。通过综合分析我们初步定位到26个Pygo蛋白可能调控的候选基因。目前,候选基因的鉴定还在进一步进行中。