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背景神经钙粘蛋白（N-cadherin）是钙粘蛋白家族成员中最早在鸡胚神经管中被发现,主要在神经系统中介导细胞黏附,影响神经细胞的分选、迁移、定位及轴突生长和路径选择。在细胞内,CTNNB1基因编码的β-catenin不仅与cadherin形成复合物影响细胞间的粘附性,还是经典Wnt信号通路中的关键调节因子,在细胞增殖和粘附中起重要作用。目前学者们多侧重于cadherin和β-catenin各自的功能研究,而β-catenin与钙粘蛋白之间的作用关系至今鲜有报导。因此,本研究通过超表达N-cadherin探索其对细胞粘附及连环蛋白家族成员表达的影响,进一步结合CRISPR-Cas9技术研究敲除CTNNB1基因后对细胞粘附和经典Wnt信号通路的影响。目的1.探索N-cadherin超表达对细胞粘附及连环蛋白家族成员表达的影响。2.研究N-cadherin和β-catenin相互作用对细胞粘附的影响。3.探究CTNNB1基因敲除对细胞增殖及经典Wnt信号通路的影响。方法1.构建N-cadherin超表达载体（pCAG-N-cad-EGFP）,细胞粘附实验检测N-cadherin超表达对细胞粘附的影响,western blotting技术检测N-cadherin超表达对β-catenin及其他连环蛋白家族成员表达的影响。2.构建CTNNB1-sgRNA载体（pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin）,利用Lipofectamine 3000脂质体转染试剂盒将其与pST1374-NLS-flag-linker-Cas9载体共转染HEK 293T细胞。筛选出CTNNB1基因敲除的HEK 293T细胞株（CTNNB1KOO HEK293T）,CTNNB1KO和CTNNB1WTT HEK 293T细胞将被用于后续实验。3.MTT实验、细胞粘附实验、流式细胞术分别检测CTNNB1KO和CTNNB1WTT HEK 293T细胞的增殖活性、细胞粘附性、细胞周期和凋亡,分析CTNNB1基因敲除对HEK 293T细胞行为的影响。4.qPCR和western blotting技术分别从转录水平和蛋白表达水平检测相关钙粘蛋白及经典Wnt信号通路相关基因的表达情况,研究CTNNB1基因敲除对N-cadherin及经典Wnt信号通路的影响。结果1.N-cadherin超表达增强了细胞粘附性而抑制了细胞的迁移能力;N-cadherin超表达使得细胞内连环蛋白家族中α-catenin、β-catenin和p120-catenin蛋白表达均显著上升（P<0.05）,其中β-catenin的变化最为明显,而γ-catenin表达下调但差异不显著（P>0.05）。2.构建出CTNNB1-sgRNA载体,并成功转染至HEK 293T细胞,筛选获得CTNNB1基因敲除的HEK 293T细胞,DNA检测结果显示在CTNNB1基因的第3号外显子上有7个碱基的缺失,这一缺失导致移码突变,使得该序列提前终止编码。3.MTT实验表明,β-catenin的缺失显著降低了细胞的粘附和增殖能力。然而,使用膜联蛋白V-荧光素异硫氰酸酯/碘化丙啶（Annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide,V-FITC/PI）染色的流式细胞术表明,β-catenin的缺失对HEK 293T细胞凋亡的影响不显著。4.qPCR结果显示CTNNB1KOO HEK 293T细胞中GSK-3β,c-Myc,CCND1（编码细胞周期蛋白D1,cyclin D1）,CCNE1（编码细胞周期蛋白E1,cyclin E1）,CDK4和CDK6的表达均低于CTNNB1WTT HEK 293T细胞。其中,GSK-3β、CCND1和CCNE1有统计学意义（P<0.001）。Western blotting结果显示,cyclin D1和N-cadherin蛋白的表达水平显著降低（P<0.01）,γ-catenin表达水平显著增加（P<0.001）。而E-cadherin,α-catenin,GSK-3β,c-Myc,cyclin E1,CDK2,CDK4,CDK6蛋白的表达水平无显著变化（P>0.05）。这些结果表明CTNNB1基因敲除通过经典Wnt信号通路抑制细胞增殖。结论1.N-cadherin超表达促进细胞突起形成和细胞粘附,并影响连环蛋白家族成员的表达,其中β-catenin的变化最为显著。2.β-catenin缺失阻碍了cadherin·β-catenin·α-catenin复合物的形成,改变了细胞粘附性;并影响经典Wnt信号通路,抑制细胞增殖。