本研究主要用RNAi的方法，对虎纹蛙病毒(TFV)部分基因进行毒力鉴定。 通过体外转录(invitrotranscription)的方法，合成TFV部分基因特异的siRNA，把siRNA转染FHM细胞，随后进行TFV感染。通过定期观察细胞病理变化(cytopathogeniceffect，CPE)的方法，直接检测siRNA对病毒增殖的影响；应用半定量RT-PCR(Sq-RT-PCR)的方法进行基因表达分析，检测siRNA对基因表达水平的影响；同时应用病毒滴度(TCID50)测定的方法，检测病毒量及其毒力。通过分析基因表达水平(Sq-RT-PCR)与CPE及TFV滴度的关系，初步鉴定TFV毒力相关的基因，进一步发掘有研究意义的基因及其功能。 首先在48孔板中优化了转染条件：应用Lipofectamine2000TMReagent将体外转录的siRNA导入FHM细胞，每孔转染浓度为500nM，转染体积为80μl。 干扰实验对TFV的63个ORF进行筛查，初步鉴定出其中的30个可能与TFV毒力相关，包括ORF003，004，007，010，015，022，023，025，029，032，035，036，038，041，045，048，050，051，053，057，065，074，076，077，084，087，097，099，100和104。其中，16个对TFV增殖和毒力可能起到至关重要的作用：ORF010，015，022，025，035，036，038，041，045，048，051，065，077，087，097和104；14个与TFV毒力相关，可能起到次重要的作用：ORF003，004，007，023，029，032，050，053，057，074，076，084，099和100。 对ORF087，097，016和022进行深入研究，应用Sq-RT-PCR和测定TCID50的方法，分别检测病毒感染24，36，42，48和60h后基因的表达水平和病毒量及病毒毒力，建立了一套比较完善的TFV全基因组RNA干扰的研究方法，为以后全面开展深入研究搭建了良好的技术平台。