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水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarfvirus,RBSDV)由介体灰飞虱以持久循回方式进行传播,RBSDV侵染后导致植物矮缩等症状,严重影响粮食产量。研究表明P8蛋白是水稻黑条矮缩病毒粒子的核心结构蛋白,具有转录抑制活性,然而是否具有其他生物学功能尚未见报道。本研究通过筛选与P8蛋白互作的寄主因子,研究其在RBSDV侵染过程中的作用。同时我们还在籼粳稻中筛选出了对RBSDV抗性较强的品种。主要结果如下:1.本研究利用酵母双杂交技术,以pGBKT7-P8为诱饵钓取水稻cDNA文库,获得了包括OsSEUSS在内的10个潜在互作因子。2.酵母双杂交实验表明OsSEUSS与P8蛋白在酵母中互作,且P8的NTP结构域和OsSEUSS的C-末端是二者互作必需的。双分子荧光互补实验结果显示二者互作定位在细胞核中,免疫共沉淀和共振能量转移及荧光寿命成像实验进一步表明二者在本氏烟细胞内互作。进一步酵母双杂交实验表明P8蛋白不与OsSEUSS的同系物OsSLK1、OsSLK2互作,说明OsSEUSS与P8蛋白互作具有特异性。3.OsSEUSS在RBSDV侵染水稻后显著性下调表达,表明OsSEUSS在RBSDV侵染过程中发生了应答。本研究构建了过表达转基因OE-OsSEUSS与缺失突变体cas-osseuss,二者在性状上表现出明显差异。与中花11(ZH11)对照相比,过表达转基因OE-OsSEUSS的主根增长且根毛数量增加,相反cas-osseuss突变体的主根变短且根毛数量减少。RBSDV侵染后,OE-OsSEUSS过表达转基因则表现为对RBSDV较敏感,感病植株矮化更严重,体内的病毒mRNA水平高于ZH11,而cas-osseuss感病株高显著性高于ZH11,体内的病毒mRNA水平也显著性降低。这些结果表明OsSEUSS负调控水稻防御RBSDV的侵染。4.对浙江省20个主栽水稻品种进行人工接种RBSDV后移栽大田,30 d后检测结果表明籼稻品种中的深两优5814和Y两优302病毒mRNA水平显著低于粳稻品种中的淮5和秀水14,而深两优5814和Y两优302中茉莉酸和水杨酸途径相关基因OsMYC2及OsNPR1的mRNA表达水平则显著性高于淮5和秀水14,表明植物激素茉莉酸(JA)和水杨酸(SA)在水稻抵抗病毒侵染过程中发挥着重要的作用。综上所述,本研究筛选到寄主因子OsSEUSS与P8蛋白发生特异性互作,并通过体内外互作实验进行了验证。OsSEUSS负调控寄主防御RBSDV的侵染。此外,本研究还筛选到JA和SA途径相关基因表达量高的水稻品种对RBSDV抗性较强,相反JA和SA途径相关基因表达量低的水稻品种则易感染RBSDV,这为今后筛选抗RBSDV材料提供新的策略和思路。