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目的: 1、观察姜黄素类似物L6H4对高脂大鼠和2型糖尿病大鼠肝脏功能及形态的影响。 2、观察姜黄素类似物L6H4抑制TIMP-2、MMP-2、TGF-β1蛋白的表达与延缓2型糖尿病性肝纤维化之间的关系。 方法: 本次实验针对雄性大鼠，由温州医科大学实验动物中心提供60只SD雄性大鼠（体重160g-200g），SPF级。共随机分为五组:正常对照组（NC组）、高脂组（HF组）、高脂治疗组(FT组)、糖尿病组(DM组)，糖尿病治疗组(DT组)，具体过程如下所述。经过普通饲料喂养1周后，随机分为两组:正常对照组8只(NC组，n=8)，实验组52只(EP组，n=52)。NC组继续用普通饲料喂养，EP组大鼠给以高糖高脂饲料喂养4周后，随机分成2组:高脂实验组20只，糖尿病实验组32只。糖尿病实验组大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ，streptozotocin)，剂量为30mg/kg，STZ注射72小时后尾静脉采血测空腹血糖（血糖浓度大于16.7mmol/L时造模成功），其中，8只大鼠造模失败被剔除本次实验。作为对照，NC组及高脂实验组大鼠腹腔注射等容积的枸橼酸缓冲液。同时将高脂实验组大鼠随机分为2组:高脂组8只（HF组，n=8）、高脂治疗组12只（FT组）;糖尿病实验组随机分2组:糖尿病组(DM组)10只、糖尿病治疗组（DT组）14只。后四组继续以高脂饲料喂养，FT组及DT组用L6H4灌胃8周，剂量为0.2mg· kg-1·d-1，其余组给以等容积的1％羧甲基纤维素钠灌胃。喂养过程中，高脂治疗组、糖尿病组、糖尿病治疗组分别有4只、2只、6只意外死亡，均剔除本实验。在实验过程中，这些大鼠自由饮食饮水，每天称重一次。实验结束后检测以下指标:(1)各组体重变化;(2)生化指标检测:空腹血糖(FPG)，血胰岛素(FIN)，计算血胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)，血脂TC、TG、LDL-c、HDL-c及LDL-c/HDL-c比值;(3)血清肝功能指标检测:血ALT、ALB;(4)肝脏形态学观察:采用HE染色、油红O染色和Masson胶原染色法并在光镜下观察肝脏形态学改变，透射电镜下观察其超微结构的改变;(5)免疫组化法检测:大鼠肝脏TIMP-2、MMP-2、TGF-β1的蛋白表达水平，采用Image-Pro Plus6.0图像处理软件分别测量累计吸光度值(IOD)，对其进行定量分析，并对所得数据采用统计学分析。 结果: 1、各组体重比较: 与NC组相比，HF组大鼠体重明显增加(P＜0.01)，DM组大鼠体重明显下降(P＜0.01)，差异有统计学意义;经L6H4干预治疗后，FT组、DT组大鼠比HF组、DM组体重明显升高(P＜0.01)，差异有统计学意义。 2、血FPG、FINs、HOMA-IR水平: 与NC组相比较，HF组、DM组FPG、HOMA-IR、FINs水平均明显升高（P＜0.01）;经L6H4干预后，DT组大鼠的FPG、FINs、HOMA-IR均明显降低（P＜0.01），FT组大鼠FINs水平降低（P＜0.05），FPG、HOMA-IR明显降低（P＜0.01）。 3、血脂TC、TG、LDL-c、HDL-c及LDL-c/HDL-c比值: 与NC组比较，DM、HF组血浆TG、TC、LDL-c、LDL-c/HDL-c比值水平显著升高（P＜0.01），HDL-c水平明显降低（P＜0.01），差异有统计学意义;经L6H4干预后，FT组、DT组大鼠TG、TC、LDL-c、LDL-c/HDL-c比值水平显著降低（P＜0.01），FT组HDL-c水平升高（P＜0.05），DM组HDL-c水平明显升高（P＜0.01），差异有统计学意义。 4、血清肝功能的检测 与NC组对照，HF组、DM组大鼠血清ALT明显升高(P＜0.01)，ALB水平显著下降(P＜0.01)，差异有统计学意义;经L6H4干预后，FT组、DT组大鼠ALT水平明显降低(P＜0.01)，FT组ALB水平升高(P＜0.05)，DM组ALB水平明显升高(P＜0.01)，差异有统计学意义。 5、肝脏形态学观察: 5.1光镜观察: (1) HE染色:与NC组相比，HF组肝细胞脂肪变性，细胞浆内出现大小不等的脂滴，伴有炎性细胞浸润;DM组肝小叶结构被破坏，肝细胞部分坏死，脂肪变性更加明显，纤维间隔增厚，汇管区的胶原纤维增生包绕周围细胞，伴有多灶区炎症细胞浸润;L6H4干预后，相应治疗组肝脏组织病变有所减轻。 (2)油红O染色:与NC组大鼠肝脏相比，HF组、DM组大鼠见肝细胞胞浆不同程度着色红染，脂滴分布密集;L6H4治疗后，相应治疗组肝细胞红染程度明显减轻。 (3) Masson染色:与NC组相比，HF组大鼠肝小叶结构尚且较为完整，肝细胞脂肪变性，有少量胶原纤维形成，但无明显纤维化形成;DM组肝小叶结构被破坏，细胞索排列紊乱，肝细胞脂肪变性，肝脏纤维组织增生明显，汇管区可见粗大的胶原纤维，实质细胞间也可见亮绿色纤维条索。L6H4干预后，相应治疗组亮绿色阳性基质有所减少。 5.2电镜观察: 与NC组相比，HF组及DM组大鼠肝细胞内脂质颗粒形成，大小不一，部分相互融合成巨大脂滴，核固缩，粗面内质网增多，线粒体肿胀，密度升高。L6H4干预后，相应治疗组大鼠肝细胞内脂质颗粒数量减少，核固缩减轻，线粒体增多，肿胀明显减轻，板状嵴清晰。 6、大鼠肝脏TIMP-2、MMP-2、TGF-β1蛋白表达的观察: 与NC组相比，DM组、HF组大鼠可见肝组织内TGFβ1、TIMP-2表达明显增加;L6H4干预后，FT、DT组大鼠TGFβ1、TIMP-2表达量明显减少。 与NC组相比，HF组、DM组中MMP-2蛋白表达明显降低;经L6H4干预后，FT、DT组MMP-2阳性表达明显升高。 结论: 1、L6H4可降低高脂和2型糖尿病大鼠的血糖、血脂、血胰岛素水平，改善其糖脂代谢和胰岛素抵抗。 2、L6H4可改善高脂和2型糖尿病大鼠肝脏形态学改变。 3、高脂和2型糖尿病大鼠TIMP-2、TGF-β1蛋白表达程度升高、MMP-2表达程度降低，表明可能对肝纤维化的形成有促进作用。 4、L6H4干预后，高脂和2型糖尿病大鼠肝脏TIMP-2、TGF-β1蛋白表达水平降低、MMP-2表达升高，可能是其改善肝脏形态，延缓纤维化的机制之一。