【摘 要】
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目的 葡萄糖是β细胞分泌胰岛素的刺激物,短期的高浓度葡萄糖作用可促进β细胞的胰岛素合成与分泌。然而长期高糖作用却可导致β细胞的功能损害。研究表明葡萄糖是通过其
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目的 葡萄糖是β细胞分泌胰岛素的刺激物,短期的高浓度葡萄糖作用可促进β细胞的胰岛素合成与分泌。然而长期高糖作用却可导致β细胞的功能损害。研究表明葡萄糖是通过其刺激β细胞产生的胰岛素再作用于β细胞自身来上调胰岛素的合成及分泌效应的。与周围胰岛素靶组织一样β细胞也存在胰岛素受体及胰岛素信号通路的一系列蛋白,其中与胰岛素基因表达及分泌活动相关的主要是PI-3K信号途径。胰岛素通过PI-3K信号途径活化IDX-1等基因转录激活因子上调其自身的基因转录。抑制PI-3K的活性可使IDX-1等活性下调从而使胰岛素刺激的胰岛素基因表达下降。推测2型糖尿病的葡萄糖毒性作用机制与减低PI3-K活性并下调胰岛素基因转录的激活因子IDX-1的活性表达有关,最终导致胰岛素的合成及分泌减少。本研究通过对高糖作用一定时间的β细胞的胰岛素基因表达及分泌功能的检测来观察β细胞功能障碍的表现模式。并进一步对功能受损的β细胞进行分子生物学检测,通过观察长期高糖作用对KI-3K及IDX-1活性及表达的影响来揭示高糖导致β细胞功能损伤的分子机制。 方法 1 Wistar大鼠体外胰岛分离及培养和β细胞功能损伤模型的建立 采用Shewade的改良的胰岛分离方法进行β细胞原代培养,经DTZ特异染色鉴定并待生长状态稳定后,将细胞分为三组,分别给予A组5.5mM,B组11.1mM,C组22.2mM的系列糖浓度孵育,在孵育的第1,2,3,4周末,各取一组细胞(n=4)用放免法测定在16.7mN葡萄糖刺激后10min和1h以及100nM胰岛素刺激5min后的培养液上清中的胰岛素含量。用半定量
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