牡丹凝集素分离、鉴定及生物活性研究

来源 :大连海洋大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:liuln6
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牡丹是毛茛科芍药属植物,为多年生落叶灌木。植物凝集素主要存在于根、茎、叶、种子及果实中。目前未见从牡丹中提取凝集素的报道。因而选择从牡丹种子中提取凝集素用于研究。本研究中,通过分离纯化提取牡丹凝集素并对其凝血活性、糖特异性、抗氧化活性、抑菌活性和对细胞的作用等生物活性方面及与富勒烯复合物制备方面做了研究,旨在探索这种新型凝集素的生物活性,为进一步开发利用凝集素提供基础数据。所得的主要研究结果如下:牡丹种子经破碎、抽提、硫酸铵分级沉淀、Cellulose DE-52和TSKgel G3000PWXL色谱柱分离纯化出具有凝血活性的单一对称色谱峰的牡丹凝集素(PSL),其凝血活性受D-(+)-甘露糖、D-半乳糖、L-鼠李糖抑制。SDS-PAGE结果表明,PSL相对分子质量为12 kDa。氨基酸组成检测结果表明PSL含有谷氨酸、天门冬氨酸、甘氨酸等16种氨基酸。其中谷氨酸的含量最高,占比达到19.66%。抑菌实验表明牡丹凝集素具有抑制希瓦氏菌、枯草芽孢杆菌的作用。牡丹凝集素对细胞的增殖抑制实验结果表明牡丹凝集素在一定浓度范围内具有能够促进HBL-100(人乳腺细胞)、ES-2细胞(人卵巢透明细胞癌细胞)和小鼠脾细胞有丝分裂的作用。牡丹凝集素对HBL-100、ES-2细胞增殖实验结果表明,牡丹凝集素在低浓度时对HBL-100细胞和ES-2细胞具有促进有丝分裂的作用。对小鼠脾细胞增殖研究表明,牡丹凝集素在低、中浓度范围内能显著促进小鼠脾细胞增殖,而且在协同CAL作用时,其协同小鼠脾细胞增殖效果高于单独使用牡丹凝集素。在牡丹凝集素与富勒烯复合物制备研究中,通过傅里叶红外光谱分析发现牡丹凝集素能够与富勒烯相互作用,牡丹凝集素通过氨基与富勒烯的亲电加成反应被修饰至碳笼表面,同时多个羟基也被键合到富勒烯表面上。通过抗氧化实验发现,纯化后牡丹凝集素以及牡丹凝集素富勒烯复合物均具有清除DPPH、ABTS、羟基自由基以及清除超氧阴离子的作用,富勒烯-凝集素复合物抗氧化活性总体优于单一牡丹凝集素。
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