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研究背景多囊卵巢综合征(PCOS)是一种临床高度异质、病因复杂的疾病,但目前其发病机制仍不清楚。胰岛素抵抗(insulin resistanceIR)和高胰岛素血症是PCOS患者主要的病理生理改变,可能在PCOS的发生发展中起关键的作用。多种促炎细胞因子参与IR的发生发展,而且慢性炎症在PCOS远期并发症的发生发展中起重要作用。因此有学者提出慢性炎症可能是PCOS发病机制之一,炎症学说及其与PCOS的关系也成为研究热点。肿瘤坏死因子-α (TNF-α)可调节慢性炎症及多种代谢紊乱,在胰岛素抵抗中起重要作用。研究证实,PCOS患者血清TNF-α水平与胰岛素抵抗存在病理生理上的关系。众多研究发现PCOS患者血清TNF-α水平明显高于对照组。另有研究发现TNF-α尚参与到PCOS患者的雄激素代谢过程中,与PCOS患者的高雄激素血症相关,并且TNF-α的这种作用是独立于IR及肥胖之外的。国内外已有许多有关TNF-α基因多态性与PCOS相关性的研究,结果尚缺乏一致性。这种研究结果不一致的现象可能是由于人群分层造成的。巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factors, MIF)是一个关键的前炎症因子,是部分炎症性疾病中的关键介质,它是由T淋巴细胞分化的、具有复杂生物活性的细胞因子,具有调节巨噬细胞、淋巴细胞的免疫功能及内分泌功能的作用,也可以负反馈调节糖皮质激素的免疫抑制功能。MIF存在于各个器官组织中,参与多种疾病的病理损伤过程。有研究表明,MIF与动脉粥样硬化、冠心病、糖尿病等代谢性疾病的发生发展密切相关。MIF基因-173G/C是目前基因研究的热点,已有多项研究证实MIF-173位点与幼年特发性关节炎、溃疡性结肠炎、克隆病等自身免疫性疾病的发病有关。我中心之前的病例-对照研究发现该基因位点与PCOS发病相关。由于传统病例-对照研究设计的限制,某等位基因与某疾病的相关性可能是由因种族及环境等因素的差异引起的人群分层所导致的,也就是说病例-对照研究可能会由于可能存在的人群分层而产生假阳性结果。因此采用较传统病例-对照更准确、可靠的研究方法有助于明确PCOS的易感基因及其发病机制。以核心家系为基础的相关研究一传递不平衡检验(Transmission Disequilibrium Test,TDT),是近年来广泛采用的研究多基因病相关基因的有效方法。TDT通过评价杂合子父母的某个等位基因是否比其他等位基因优先传递给患病子女来检验该等位基因是否与某疾病相关。因为以家庭为基础的相关研究保证了病例组与对照组遗传背景的一致性,所以可以消除由于病例组与对照组的遗传背景差异而导致的假阳性关联结论。研究目的本研究采用较传统病例-对照研究更准确、可靠的TDT进一步探讨TNF-α基因rs1799964、rs1799724及MIF基因rs755622多态性与我国PCOS发病易感性的相关性。研究方法以216例PCOS先证者及其父亲、母亲所组成的满足经典TDT分析的核心家庭为研究对象,PCOS诊断标准按照2003年鹿特丹欧洲生殖年会(ASRM/ESHRE)修订的标准。在216个中国汉族核心家系中采用直接测序法检测TNF-α基因rs1799964、rs1799724及MIF基因rs755622多态性。PCOS患者及其父母均测定身高、体重、腰围、臀围、收缩压、舒张压,并计算体重指数、腰臀比。留取空腹血标本检测基因多态性,并测定血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、空腹血糖、空腹胰岛素,另外PCOS患者均测定黄体生成素、卵泡刺激素、雌二醇、垂体泌乳素、睾酮水平及OGTT2小时血糖及胰岛素水平。PCOS患者根据体重指数<25或≥25分为A组(非肥胖组)、B组(肥胖组),其父亲与母亲相应的根据体重指数<25或≥25分为C组和D组,E组和F组。结果216例PCOS患者的平均年龄为27.08(27.08±3.36),体重指数为24.78kg/m2(24.78±4.34)。总睾酮平均水平为58.88ng/dl(58.88±25.51)。空腹血糖及空腹胰岛素水平分别为5.63mmol/L(5.63±1.34)和12.09mIU/L(12.09±7.67)。B组与A组比较体重(P<0.001)、腰围(P<0.001)、臀围(P<0.001)、腰臀比(P<0.001)、收缩压(P<0.001)、舒张压(P<0.001)、甘油三酯(P=0.006)、空腹胰岛素(P<0.001)、2小时胰岛素(P=0.001)均明显升高,垂体泌乳素明显降低(P=0.009),差异均具显著性。PCOS患者父亲按体重指数分为C和D组,肥胖组体重(P<0.001)、腰围(P<0.001)、臀围(P<0.001)、腰臀比(P<0.001)、收缩压(P<0.001)、舒张压(P<0.001)、空腹胰岛素(P<0.001)、甘油三酯(P<0.001)及低密度脂蛋白(P=0.025),均明显升高,两组比较均有显著性差异。F组与E组比较,身高(P=0.023)、体重(P<0.001)、腰围(P<0.001)、臀围(P<0.001)、腰臀比(P<0.001)、收缩压(P=0.005)、舒张压(P<0.001)、空腹胰岛素(P<0.001)及甘油三酯(P<0.001)均显著升高。PCOS患者及其父母肥胖组与非肥胖组比较,rs1799964、rs1799724及rs755622基因型频率均无显著性差异。三个位点最小等位基因频率分别为0.178(rs1799964)、0.118(rs1799724)、0.191(rs755622),基因型分布均符合哈迪一温伯格平衡。在本研究的216个核心家庭中,SNP rs1799964父或母为非纯合子的家庭共有112个,rs1799724父或母为非纯合子的家庭共有76个,rs755622父或母为非纯合子的家庭共有129个,上述家庭被纳入TDT分析中。TDT提示rs1799964T (transmitted: nontransmitted=73:39; x2=10.321)、rs1799724C(transmitted: nontransmitted=43:33; x2=1.316)及rs755622C(transmitted: nontransmitted=70:59; x2=0.938)均观察到存在过度传递现象,其中rs1799964T过度传递有统计学意义(P=0.0013)。对阳性位点rs1799964进行多重检验验证,仍具有显著性差异(P=0.003)。结论TNF-α基因rs1799964位点多态性与PCOS的发病易感性相关,T等位基因可能是增加其发病风险的关键等位基因。rs755622多态性与PCOS的发病易感性无明显相关,可能不是PCOS的易感基因。