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目的:通过检测受体酪氨酸激酶RON在人胃粘膜上皮细胞和胃癌细胞中的表达,以及研究其变异体RONΔ160在体外、体内实验中对胃癌细胞生长的影响和小分子抑制剂对RONΔ160的抑制作用,以期探讨RON及RONΔ160在胃癌发生发展中的作用及为探索胃癌治疗新靶点建立理论基础。
方法:采用Western blot、实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光技术检测人胃粘膜上皮细胞GES-1及胃癌细胞SGC-7901、MGC-803、KATOⅢ中RON的表达,分析比较它们之间的差异;构建含RONΔ160的重组质粒稳定转染至低表达或不表达RON的胃癌细胞,观察胃癌细胞形态改变;并采用CCK-8 Cell Proliferation Assay、细胞迁移实验、细胞侵袭实验、细胞周期实验和细胞凋亡实验分别检测其细胞增殖、迁移、侵袭、增殖周期和凋亡情况;采用胃癌细胞构建的荷瘤裸鼠动物模型,比较RONΔ160和c-Met/RON小分子抑制剂对裸鼠皮下移植瘤的影响。
结果:RON在人胃粘膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞SGC-7901、MGC-803中低表达或基本不表达,在胃癌细胞KATOⅢ中呈高表达;上调RONΔ160在MGC-803细胞中的表达可引起细胞形态向纺锤形转变,促进了MGC-803细胞的增殖、迁移、侵袭,提高了S期细胞的比例,MSP可增强上述生物学活性(p<0.05),而细胞凋亡检测显示各组细胞均很少凋亡(p>0.05);RONΔ160可促进MGC-803细胞在裸鼠体内的生长,包括增大肿瘤体积、提高肿瘤重量、缩减成瘤潜伏期等,而c-Met/RON小分子抑制剂能抑制RONΔ160的致瘤性(p<0.05)。
结论:RON在某些胃癌细胞中呈高表达,而在人胃黏膜上皮细胞中呈低表达。无论从体外或体内均证明RON变异体RONΔ160在胃癌细胞中具有致瘤性,其特异性小分子抑制剂可能具有一定的靶向治疗作用,本研究提示RON及变异体RONΔ160在胃癌发生发展中发挥重要作用,并为探索胃癌治疗新靶点及相应靶向药物开发建立理论基础。