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目的:本研究主要探讨Smac基因过表达联合天花粉蛋白(TCS)处理对人宫颈癌Caski细胞凋亡的影响及其相关机制。
方法:Western blot法鉴定TCS对人宫颈癌Caski细胞Smac蛋白水平表达的影响;构建真核表达质粒 pcDNA3.1(-)/Smac,将该质粒稳定转染入宫颈癌 Caski 细胞后,RT-PCT和Western blot法分别在mRNA和蛋白水平上的鉴定筛选得到的Smac高表达的细胞Caski/Smac;MTT法观察Smac高表达对Caski细胞生长及对TCS敏感性的影响;流式细胞仪分析 TCS对 Caski细胞凋亡的影响;Western blot 法分析 TCS对Caski细胞凋亡相关因子cyt-c的表达影响。
结果:①TCS能诱导Caski细胞内Smac基因表达,且呈时间与浓度依耐性;②成功获得Smac基因高表达的细胞株Caski/Smac;③Smac高表达使Caski细胞生长速度明显减慢(P<0.01),且对TCS的敏感性显著性增加(P<0.01);④TCS作用于Caski细胞可诱发其凋亡,但Smac高表达的细胞凋亡更为明显,差异具有显著性(P<0. 01)。
结论:Smac基因过表达能增加Caski细胞对TCS的敏感性,在同等药物浓度下能更明显抑制细胞增殖和促进其凋亡。此外,TCS也能够诱导细胞中Smac基因表达,这可能是其促细胞凋亡的机制之一。