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目的探讨基于第Ⅱ组代谢型谷氨酸受体（mGluR2和mGluR3）激动作用的蜘蛛香环烯醚萜类成分抗焦虑机制。方法1.采用脂质体转染方法构建Vero-Ga15-mGluR2细胞和Vero-Ga15-mGluR3细胞,并采用Real-Time PCR验证目的基因GNA15、mGluR2和mGluR3的表达。2.采用CCK-8法检测不同浓度的蜘蛛香总环烯醚萜（totaliridoids of roots and rhizomes of Valeriana jatamansi Jones,TIV）、蜘蛛香素E、mGluR2和mGluR3激动剂（LY354740）和谷氨酸对Vero-Ga15-m GluR2细胞和Vero-Ga15-mGluR3细胞存活的影响,以便确定药物的浓度。采用Fluo-3/AM作为钙离子(Ca2+)荧光探针,使用高内涵药物筛选系统检测TIV和蜘蛛香素E对Vero-Ga15-mGluR2和Vero-Ga15-mGluR3细胞内Ca2+荧光强度的影响。3.采用梯度离心法制备大鼠大脑皮质突触体,运用透射电子显微镜鉴定其微观形态,以及检测突触体乳酸脱氢酶（LDH）活性。采用流式细胞仪检测TIV和蜘蛛香素E对大鼠大脑皮质突触体内Ca2+荧光强度的影响。4.采用大鼠应激焦虑模型,通过高架十字迷宫和敞箱行为学实验验证TIV抗焦虑作用,酶联免疫法检测大鼠大脑皮质的腺苷酸环化酶（AC）活性、环磷酸腺苷（cAMP）含量、谷氨酸（Glu）含量,Western Blot法检测大鼠大脑皮质PKAa/b/g、mGluR2和mGluR3蛋白表达水平。结果1.转染细胞—Vero-Ga15-mGluR2和Vero-Ga15-mGluR3构建成功,目的基因GNA15、mGlu R2和mGluR3的表达量高,符合细胞实验的要求。2.用高内涵药物筛选系统检测TIV和蜘蛛香素E对Vero-Ga15-mGluR2细胞和Vero-Ga15-mGluR3细胞钙流的影响,对于Vero-Ga15-mGluR2细胞,与正常组相比较,阳性药组Ca2+荧光平均值显著增强（P<0.05）;谷氨酸组、3μg/mL和12μg/mL TIV组、10μM和20μM蜘蛛香素E组荧光值非常显著增强（P<0.01）;对于Vero-Ga15-mGluR3细胞,与正常组相比,阳性药组,12μg/mL TIV组荧光平均值非常显著增强（P<0.01）;谷氨酸组,6μg/m L TIV组,10μM蜘蛛香素E组荧光值显著增强（P<0.05）。3.通过电镜观察,制备的突触体包含典型的突触体形态结构特征;检测突触体的乳酸脱氢酶活性,悬液中总的乳酸脱氢酶活性与上清液维持在一定比例不变,用流式细胞仪检测蜘蛛香环烯醚萜类成分对突触体内Ca2+的影响,与正常组相比较,阳性药组、6μg/m L TIV组、20μM蜘蛛香素E组荧光平均值非常显著降低（P<0.01）;10μM蜘蛛香素E荧光值显著降低（P<0.05）。4.大鼠应激焦虑模型成功建立,在2个焦虑模型行为学实验中,模型组动物产生了焦虑状态,而阳性组及TIV各剂量组（5、10和20mg/kg）动物的焦虑行为均有明显改善。抗焦虑机制研究结果显示,与模型组比较,TIV的高、低剂量组大脑皮质AC活性,中剂量组大脑皮质的cAMP含量,高、中剂量组大脑皮质的Glu含量均非常显著降低（P<0.01）,高剂量组大脑皮质的cAMP含量显著降低（P<0.05）;高、低剂量组mGluR2表达水平和中、低剂量组mGluR3表达均非常显著增加（P<0.01）;中、低剂量组PKAa/b/g表达水平非常显著降低（P<0.01）。结论1.蜘蛛香环烯醚萜类成分对mGluR2和mGluR3有激动作用。2.TIV抗焦虑作用机制和激动mGluR2和mGluR3,下调AC-cAMP-PKA信号通路,从而负反馈抑制谷氨酸的释放有关。