尖锐湿疣角质形成细胞中KRT17的表达对自身增殖及凋亡的作用研究

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背景:尖锐湿疣是一种由HPV感染所致的生殖器、肛周疣状增生的性传播疾病。大量研究已经证实尖锐湿疣中的角质形成细胞存在增殖异常的现象,但是关于其角质形成细胞增殖异常的相关机制仍不是十分清楚。有研究发现尖锐湿疣中的角质形成细胞高表达KRT17,另有研究表明高危型HPV诱导的宫颈癌细胞中KRT17的表达与细胞增殖能力相关。因为角质形成细胞的异常增殖是尖锐湿疣疣体形成的基础,所以深入了解与细胞增殖相关的KRT17在尖锐湿疣角质形成细胞中的作用有助于了解尖锐湿疣的发病机制,进而有利于尖锐湿疣的预防与治疗。目的:探究在尖锐湿疣中,高表达的KRT17对疣体中HPV感染和非HPV感染的两类角质形成细胞中增殖及凋亡的作用。方法:(1)从GEO数据库获取尖锐湿疣转录组芯片,并从中筛选出尖锐湿疣较正常包皮组织表达的差异基因KRT17,利用实时荧光定量PCR技术在尖锐湿疣临床标本中加以验证;(2)使用免疫组化技术检测尖锐湿疣和正常包皮组织中KRT17、增殖指标(Ki67)的表达,免疫印迹技术检测KRT17在两组织中的表达量,并进行KRT17表达与细胞增殖的相关性分析及与尖锐湿疣患者的临床参数分析;(3)采用慢病毒感染技术将HPV11-E7导入HaCaT中,建立HPV11-E7HaCaT的尖锐湿疣细胞模型,利用siRNA技术敲低HPV11-E7 HaCaT中KRT17的表达,探究消减KRT17表达后HPV11-E7 HaCaT的细胞增殖及凋亡情况;(4)消减KRT17的表达后,通过细胞免疫荧光技术检测HPV11-E7 HaCaT的细胞骨架改变,通过流式细胞术检测HPV11-E7 HaCaT的细胞周期变化,以探究KRT17调控细胞存活的方式;(5)收集KRT17敲低后的HPV11-E7 HaCaT的上清液,制备成条件培养基,用于培养未作处理的HaCaT,检测条件培养基处理后HaCaT的增殖及凋亡的变化情况。结果:(1)mRNA转录组芯片显示尖锐湿疣中KRT17转录水平高于正常包皮组织,并与尖锐湿疣临床标本中KRT17的mRNA表达情况相一致;(2)尖锐湿疣中角质形成细胞的KRT17及增殖指标Ki67的表达均明显高于正常包皮组织,两者呈正相关,即KRT17表达越高,角质形成细胞增殖能力越强;KRT17的表达与尖锐湿疣患者的病程相关,即在病程较短的尖锐湿疣皮损中KRT17的表达高于病程较长的皮损;(3)HPV11-E7导入HaCaT,KRT17的表达上调;siRNA抑制KRT17表达后,HPV11-E7 HaCaT尖锐湿疣细胞模型的增殖减少、凋亡增加;说明HPV11-E7可以介导KRT17的表达,进而调控细胞的增殖及凋亡;(4)siRNA抑制KRT17的表达后,HPV11-E7 HaCaT的细胞骨架蛋白F-actin没有发生改变而细胞周期S期延长;(5)在敲低KRT17的HPV11-E7 HaCaT的条件培养基处理下,HaCaT的增殖受到抑制,凋亡增加,提示KRT17可能具备调控分泌因子的功能。结论:在HPV感染的角质形成细胞中,KRT17可以通过调控细胞周期的方式调控细胞的生存,即促进细胞增殖、抑制其凋亡;KRT17还可能通过调控细胞因子分泌的方式促进周围非HPV感染的角质形成细胞增殖,抑制其凋亡,从而有利于疣体的形成。
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