硫酸二甲酯处理泡桐丛枝病幼苗形态变化及SSR和AFLP分析

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泡桐丛枝病是由植原体引起的一种传染性病害,不仅给泡桐生产造成巨大的经济损失,而且也严重影响人们种植泡桐的积极性。植物总DNA甲基化水平过高或过低,都会导致植物形态发生异常。泡桐丛枝病幼苗DNA甲基化水平低于健康幼苗,清除植原体的幼苗DNA甲基化又可升高到较高水平。因此,研究植原体与泡桐DNA变化的相互关系可能有利于泡桐丛枝病发生分子机理的阐明和防治方法的建立。本研究用不同浓度硫酸二甲酯(Dimethyl sulphonate, DMS)处理豫杂一号泡桐,白花泡桐及毛泡桐病苗,在观察幼苗形态变化的同时,利用巢式PCR检测植原体,并用SSR和AFLP分析DNA碱基序列的变化情况。现将研究结果归纳如下:(1)适宜浓度的DMS处理可使病苗在形态上转变为健康苗:质量浓度为15 mg·L-1的DMS处理3h幼芽形成的幼苗仍呈现丛枝病幼苗症状,而质量浓度等于15 mg·L-1,处理5h或大于15 mg·L-1处理3h、5h的幼芽形成的幼苗形态上均呈现健康苗状态,经巢式PCR检测,除15mg·L-1DMS处理5h的幼苗内仍有植原体存在,其它形态健康苗均不存在植原体。(2)泡桐丛枝病幼苗与健康幼苗和DMS处理丛枝病幼苗DNA的SSR扩增位点相同。在SSR分子标记水平下,45对引物扩增电泳结果说明,经DMS处理的3种泡桐丛枝病幼苗与其健康苗的DNA碱基序列没有发生变化。(3)泡桐丛枝病幼苗与健康幼苗和DMS处理丛枝病幼苗的DNA在AFLP水平上未发现DNA碱基序列的改变。在AFLP分子标记水平下,97对引物扩增电泳结果说明,泡桐经DMS处理后没有引起DNA酶切位点的变化。
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