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研究背景:在世界范围内,糖尿病（diabetes mellitus,DM）是一种常见的多发性代谢性疾病,由于神经病变导致的糖尿病神经病理痛（Diabetic neuropathic pain,DNP）是最严重的一种并发症,涉及进行性神经元损伤和功能障碍。背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）中的神经元负责伤害性信息的传递,并且DRG中表达的分子或受体功能改变会导致疼痛。神经性疼痛的发展与神经元之间异常的信号传导有关,卫星胶质细胞（Satellite glial cells,SGCs）紧密地包围着DRG神经元的胞体,SGCs在伤害性信号通讯中发挥重要作用。活化和受损的细胞将大量的三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate,ATP）释放到细胞外,从而激活两种类型的P2嘌呤能受体,包括P2X和P2Y受体。有研究表明P2Y受体参与糖尿病神经病理痛,但P2Y14受体是否参与DNP,以及P2Y14受体介导DNP的过程和作用机制尚不清楚。长链非编码RNA（long noncodingRNA,lncRNA）是一类不编码蛋白的RNA分子,能够参与维持细胞和组织稳态等多种生物学过程,尽管大多数lncRNA功能尚不清楚,但lncRNA与多种疾病的发生发展密切相关。本课题通过建立2型糖尿病神经病理痛大鼠模型,探究lncRNA-UC.25+对背根神经节P2Y14受体介导大鼠糖尿病神经病理痛的作用及机制。目的:1.通过建立2型糖尿病神经病理痛大鼠模型,探究背根神经节P2Y14受体在2型糖尿病神经病理痛中的作用。2.观察lncRNA-UC.25+在大鼠DRG卫星胶质细胞上的P2Y14受体介导2型糖尿病神经病理痛中的作用。3.探究lncRNA-UC.25+调控P2Y14受体介导的2型糖尿病神经病理痛的可能机制。方法:建立2型糖尿病神经病理痛大鼠模型,并将大鼠随机分为5组:正常对照组（Control组）、2型糖尿病神经病理痛模型组（DNP组）、模型合并P2Y14shRNA处理组(DNP+P2Y14 shRNA组)、模型合并lncRNA-UC.25+shRNA处理组（DNP+UC.25+shRNA组）及模型合并阴性对照质粒处理组（DNP+Negative Control,简称DNP+NC shRNA）。实验内容:（1）测定大鼠机械性缩足痛阈值和热缩足潜伏期;（2）Real-time PCR（Q-PCR）检测各组大鼠背根神经节（DRG）中P2Y14受体和lncRNA-UC.25+的表达水平,蛋白印迹（Western blot）检测P2Y14受体的蛋白表达水平;（3）免疫荧光双标法检测各组大鼠DRG中P2Y14受体与卫星胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的共表达;（4）蛋白印迹检测白介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子（TNF-α）的表达变化;（5）蛋白印迹检测p38的磷酸化水平表达变化;（6）通过试剂盒检测各组大鼠血清及DRG中SOD活力及GSH,MDA的含量;（7）通过生物信息学技术来预测P2Y14受体的转录因子;（8）通过免疫共沉淀实验（RIP）确定与lncRNA-UC.25+相互作用的蛋白,培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）,分为两组:共转染pc DNA3.0-UC.25+×MS2bs和pc DNA3.0-Flag-2×MS2质粒实验组,共转染pc DNA3.0-12×MS2bs和pc DNA3.0-Flag-2×MS2质粒对照组,再通过蛋白印迹观察STAT1蛋白表达变化;（9）培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）,转染lncRNA-UC.25+过表达质粒和STAT1过表达质粒,通过Q-PCR和蛋白印迹观察STAT1和P2Y14受体表达变化。结果:（1）与Control组大鼠相比,DNP组大鼠机械性缩足痛阈值和热缩足潜伏期均明显降低（p<0.01）。与DNP组大鼠相比,DNP+P2Y14 shRNA组和DNP+UC.25+shRNA组大鼠机械性缩足痛阈值和热缩足潜伏期均明显升高（p<0.01）,DNP+NC shRNA组与DNP组相比无明显差异（p>0.05）;（2）与Control组相比,DNP组大鼠背根神经节中的UC.25+的表达显著升高（p<0.01）,P2Y14受体的mRNA和蛋白表达水平均明显升高（p<0.01）;与DNP组相比,DNP+P2Y14shRNA组、DNP+UC.25+shRNA组的UC.25+表达水平降低（p<0.01）,P2Y14受体的mRNA和蛋白表达水平明显降低（p<0.05）;而与DNP组相比,DNP+NC shRNA组P2Y14受体mRNA和蛋白表达无明显差异（p>0.05）;（3）免疫荧光双标结果显示:P2Y14受体与卫星胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）存在共表达,且DNP组、DNP+NC shRNA组荧光强度高于Control组（p<0.05）,DNP+P2Y14 shRNA组和DNP+UC.25+shRNA组的荧光强度低于DNP组（p<0.05）;（4）Western blot检测各组大鼠背根神经节中IL-1β和TNF-α表达变化,与Control组相比,DNP组IL-1β和TNF-α表达均明显升高（p<0.01）;与DNP组相比,DNP+P2Y14shRNA组和DNP+UC.25+shRNA组IL-1β和TNF-α表达均明显降低（p<0.01）;DNP+NC shRNA组IL-1β和TNF-α表达无明显差异（p>0.05）;（5）Western blot检测各组大鼠DRG中p38及其磷酸化水平表达变化,结果显示各组大鼠DRG中p38的表达无显著差异（p>0.05）。与Control组相比,DNP组p38磷酸化水平pp38明显升高（p<0.01）;与DNP组相比,DNP+P2Y14 shRNA组和UC.25+shRNA组pp38表达水平明显下降（p<0.01）;DNP+NC shRNA组pp38表达水平无明显差异（p>0.05）;（6）氧化应激检测结果显示:与Control组比较,DNP大鼠血清和DRG中SOD活力和GSH含量降低（p<0.01）,而MDA含量明显升高（p<0.01）。DNP大鼠经过P2Y14shRNA或UC.25+shRNA鞘内注射处理后,与DNP组相比,大鼠血清和DRG中SOD活力和GSH含量明显升高（p<0.01）,而MDA含量下降（p<0.01）。DNP+NC shRNA和DNP组相比三项指标均无明显差异（p>0.05）;（7）生物信息学技术预测结果显示:STAT1为P2Y14的转录因子;（8）免疫共沉淀实验（RIP）结果显示:与共转染pc DNA3.0-12×MS2bs和pc DNA3.0-Flag-2×MS2质粒对照组相比,共转染pc DNA3.0-UC.25+-12×MS2bs和pc DNA3.0-Flag-2×MS2质粒实验组的STAT1蛋白表达明显升高（p<0.001）;（9）在HUVEC细胞中过表达lncRNA-UC.25+后,P2Y14、STAT1的蛋白表达水平均显著升高（p<0.01）。过表达STAT1后,P2Y14蛋白表达水平显著升高（p<0.01）。结论:1.大鼠背根神经节P2Y14受体参与大鼠DNP过程,P2Y14 shRNA可缓解2型糖尿病大鼠神经病理痛。2.LncRNA-UC.25+shRNA可以缓解P2Y14受体介导的糖尿病神经病理痛,lncRNA-UC.25+可能通过直接或间接调控DRG卫星胶质细胞中的P2Y14受体从而介导DNP。3.LncRNA-UC.25+可能通过转录因子STAT1调控P2Y14受体而缓解DNP。