苦参碱与顺铂对肺癌A549细胞增殖抑制及协同作用的研究

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目的:研究不同浓度的苦参碱(matrine,MT)对非小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用、对细胞周期的影响及细胞凋亡,并与顺铂联合后的协同作用,为MT在肺癌临床治疗中的应用提供新的治疗思路和理论依据。方法:通过体外培养非小细胞肺癌A549细胞,取对数生长期细胞进行实验,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度MT组(30、60、120mg/L)、顺铂组(0.625ug/ml)、MT和顺铂联合处理组。分别作用于肺腺癌A549细胞24、48、72小时后,计算出细胞生长抑制率。倒置显微镜下观察药物对细胞形态的影响。采用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞周期变化。分别检测MT(30、60、120mg/L)组和MT与顺铂联合组。观察它们作用肺腺癌A549细胞48小时后细胞周期变化。AnnexinV/PI双染色法检测MT(30、60、120mg/L)组及MT与顺铂联合组处理肺腺癌A549细胞48小时后细胞凋亡率。结果:1.MT对肺腺癌A549细胞增殖具有抑制作用,并随着药物作用时间延长和浓度的增加,MT对肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用逐渐增强,即表现为时间—剂量依赖性;MT和顺铂组联合作用肺腺癌A549后,亦存在增殖抑制作用,且抑制作用均明显高于单药处理组,同样呈时间—剂量依赖性,尤其在干预48、72小时后,各联合处理组抑制作用更为明显。2.不同浓度(30、60、120mg/L)MT组,处理48小时后,随着药物浓度的增加,与阴性对照组比较,G1期细胞比例逐渐升高,S期细胞比例逐渐降低,顺铂处理组Gl期细胞比例降低,而S期细胞比例增加;而MT和顺铂联合处理组,发现G1期细胞比例较同剂量MT处理组低,但比顺铂处理组高,而S期细胞比例较MT处理组高,比顺铂处理组低,说明MT能阻滞肺腺癌A549细胞于G1期,顺铂阻滞A549细胞于S期,两药联合后,G1及S期细胞均被阻滞。3.不同浓度(30、60、120mg/L)MT组和顺铂(0.625ug/ml)联合MT(60mg/L)组作用于肺腺癌A549细胞48小时后,在与阴性对照组比较,MT组早期和晚期的凋亡细胞数增多,且在一定浓度范围内,凋亡细胞比例随着药物浓度的增加而增大;MT和顺铂联合后其凋亡细胞比例远高于MT单药组(P<0.05)。结论:MT对非小细胞肺癌细胞系A549细胞具有增殖抑制作用,在一定浓度范围内,具有时间和浓度依赖性,且与顺铂联合后,增殖抑制作用高于单药组,说明两药联合后具有协同作用;其细胞增殖的抑制机制,可能是和它们阻滞细胞周期,诱导了细胞凋亡相关。
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