马流行性感冒（简称马流感），是由正粘病毒科A型流感病毒属中两个抗原性不同的A型流感病毒亚型（H7N7曾称为马-1型；H3N8，曾称为马-2型）所引起的一种马属动物急性暴发式呼吸道疾病。马流感传播迅速，呈爆发性流行的特点，对养马业，尤其赛马业的危害最为严重。因此，快速、有效的进行诊断及预防马流感是非常重要的。　　 本试验针对马流感病毒核蛋白在进化过程中变异率低、保守、具有型特异性，而且在病毒复制过程中，比其他结构蛋白出现早，又是细胞免疫的靶抗原，可产生细胞毒性T淋巴细胞反应等特点，将其作为抗原捕捉ELISA的诊断抗原。　　 本实验参照GenBank登录号AY855342中的马流感病毒NP基因序列，设计合成1对NP基因30～1095碱基序列的特异性引物，PCR扩增NP基因，经鉴定未发生突变和缺失，大小与预期结果一致为1086bp基因，将其克隆至原核表达载体pET32a中，重组质粒经酶切、PCR及测序鉴定正确后，转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导表达，获得与预测分子量为60Ku的融合蛋白（包含表达载体的蛋白大小为20Ku），经Western blot及ELISA分析表明表达的融合蛋白具有良好的抗原性。将其纯化后与弗氏佐剂充分乳化，作为抗原并免疫BALb/c小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合，经筛选后得到能够稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株4B12。　　 本试验筛选一株针对马流感NP蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞株4B12，经传代、冻存和复苏，均能稳定分泌特异性抗体，为进一步研制马流感病毒抗原捕捉ELISA技术奠定了基础。