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MicroRNAs(miRNAs)是一类由高等真核生物基因组编码,类似于siRNA的非编码RNA分子,大小约20~25个核苷酸,具有高度的序列保守性、时序性和组织特异性。miRNAs对神经元的发生、分化、迁移、融合以及整个脑功能都有重要的作用,但是潜在的机制仍然不是很清楚。miR-128能够在成年的神经元中表达,具有高度的时间和空间特异性,通过调控对应的靶mRNA,并影响靶蛋白参与的信号通路,从而调控细胞许多重要的生命活动,我们研究发现在慢性应激抑郁小鼠模型中,miR-128基因相对表达量明显增加。基质相互作用分子2(STIM2)在控制钙池操纵的钙离子内流(SOCs)通道的激活方面发挥重要作用,从而能够长期调节钙离子信号控制的基因转录,细胞增殖和生长。在miR-128基因过表达的慢性不可预知应激抑郁小鼠海马,STIM2蛋白表达水平明显低于对照组。这些结果表明miR-128分子可能是治疗慢性应激抑郁的一个潜在治疗靶点。 目的:探讨miR-128分子在慢性不可预知应激抑郁小鼠模型中的变化,并研究其机制。 材料和方法:构建慢性不可预知应激(CUMS)抑郁小鼠模型。本实验采用雄性C57BL/6小鼠,在生活环境中适应一周,首先对全部小鼠进行行为学检测,比如称量体重,旷场实验(OPT),糖水偏好,行为学结束后小鼠随机分组,然后让小鼠遭受为期8周的慢性不可预知应激刺激,每周对小鼠进行体重称量,8周后再次对小鼠进行OPT检测和糖水偏好检测。CUMS小鼠造模成功后,用实时荧光定量PCR方法检测miR-128基因的相对表达水平,用生物信息学的方法预测miR-128分子下游靶蛋白,用免疫印迹法验证靶蛋白的表达水平,证明miR-128分子与预测靶蛋白能够相互作用。在N2a传代细胞瞬时转染miR-128重组质粒,48h后检测预测靶蛋白的表达是否与动物实验结果一致。 结果:正常小鼠遭受8周慢性不可预知应激刺激(CUMS)后,模型组小鼠体重明显下降;旷场实验(OPT)检测结果显示,小鼠自主运动行为和探索行为都明显较少;模型组小鼠糖水摄取量/小鼠体重明显低于对照组。实时荧光定量PCR结果表明miR-128分子的相对表达水平明显增多,根据生物信息学预测结果,STIM2是miR-128分子的下游靶蛋白,用双荧光素酶报告基因检测方法证明miR-128分子作用于STIM2-mRNA;提取动物海马组织,用免疫印迹法证明抑制STIM2蛋白水平的表达,在N2a传代细胞中免疫印迹法也证明了STIM2蛋白相对表达水平低于对照组。 结论: miR-128在慢性应激抑郁小鼠脑中表达增多,并且能与STIM2 mRNA相互作用,导致STIM2蛋白表达下调。