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目的:有报道称TIM-1与多种恶性肿瘤的生物学行为有关,然而,TIM-1在宫颈癌细胞中的表达及其对宫颈癌进展和转移的影响及机制尚不清楚。本研究旨在探讨TIM-1与宫颈癌中的表达及发生发展相关性,并探讨其参与宫颈癌侵袭转移的作用机制,为宫颈癌诊断与治疗寻找新靶点。方法:1.采用免疫组化方法检测80例人宫颈癌组织、30例宫颈上皮内瘤变组织和10例正常宫颈组织中TIM-1的蛋白表达水平差异,并结合临床及病理特征分析TIM-1的表达与年龄、病理分型、分化程度、FIGO分期、肿瘤直径、浸润深度、是否累及阴道、有无淋巴结转移、有无神经侵犯、有无脉管侵犯等参数的相关性。2.在三种不同HPV表型宫颈癌细胞系He La（HPV-18阳性）、Si Ha（HPV-16阳性）和C-33A（HPV阴性）通过q RT-PCR检测m RNA和Western blotting检测蛋白质中TIM-1的表达情况。3.采用过表达TIM-1慢病毒载体以及阴性慢病毒空载体转染TIM-1表达相对较低的He La和Si Ha胞,嘌呤霉素筛选稳定转染细胞;采用荧光显微镜观察荧光表达率及流式细胞术检测转染效率;采用q RT-PCR及Western blotting验证TIM-1表达效果。4.采用CCK-8实验及平板克隆形成实验体外观察过表达TIM-1对宫颈癌细胞系增殖能力的影响。5.采用PI单染流式细胞术检测TIM-1对宫颈癌细胞周期的影响;采用Annexin V-APC/PI双染流式细胞术检测TIM-1对宫颈癌细胞凋亡的影响。6.采用皮下裸鼠成瘤实验体内观察TIM-1对宫颈癌细胞成瘤能力的影响。7.采用划痕愈合实验、Transwell迁移实验体外观察TIM-1对宫颈癌细胞迁移能力的影响;采用Transwell侵袭实验观察TIM-1对宫颈癌细胞侵袭能力的影响。8.采用Western blotting检测过表达TIM-1后对细胞周期凋亡相关分子cyclin D1、p53、Bcl-2和Bax的影响。9.采用Western blotting检测过表达TIM-1后对细胞转移相关分子Ecadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail1、MMP-2和VEGF的影响。10.采用Western blotting检测过表达TIM-1后对细胞PI3K/AKT/m TOR通路相关蛋白PI3K、AKT、p AKT和m TOR的影响。结果:1.免疫组化结果显示TIM-1蛋白在宫颈癌组织（81.25%,65/80）中的表达明显高于宫颈上皮内瘤变组织（40%,12/30）和正常宫颈组织（0%,0/10）,差异有统计学意义（P=0.000）。TIM-1的表达与是否累及阴道呈负相关（r=-0.303,P=0.006）,与年龄、病理分型、分化程度、FIGO分期、肿瘤直径、有无浸润深度、有无淋巴结转移、有无神经侵犯、有无脉管侵犯差异无统计学意义（P>0.05）。2.q RT-PCR及Western blotting检测结果均显示TIM-1在宫颈癌细胞系C-33A、He La、Si Ha中均有表达,其中在He La和Si Ha细胞中表达相对较低。3.经过表达TIM-1慢病毒转染并用嘌呤霉素筛选后,无论是荧光显微镜观察还是流式细胞术分析结果均显示He La和Si Ha细胞稳转株的转染效率均达到90%以上;q RT-PCR和Western blotting结果均显示He La和Si Ha细胞TIM-1组的m RNA和蛋白质中的TIM-1表达水平明显高于MOCK组和NC组（P<0.001）,而MOCK组与NC组两两比较差异无统计学意义（P>0.05）。4.CCK-8实验显示He La细胞从接种第四天开始,TIM-1组吸光度明显高于MOCK组和NC组,差异有统计学意义（P<0.01）,而MOCK组与NC组间没有明显差异（P>0.05）。Si Ha细胞从接种第二天开始,TIM-1组吸光度明显高于MOCK组和NC组,差异有统计学意义（P<0.001）,而MOCK组与NC组间没有明显差异（P>0.05）。克隆形成实验结果显示,He La和Si Ha细胞TIM-1组的克隆形成能力明显高于MOCK组和NC组（P<0.001）,而MOCK组与NC组间没有明显差异（P>0.05）。5.流式细胞术检测细胞周期结果显示,在He La细胞中过表达TIM-1后,TIM-1组较MOCK组和NC组中处于细胞周期S期的细胞数量显著增加（P<0.001）,处于细胞周期G2期的细胞数量显著增加（P<0.001）,处于细胞周期G1期的细胞数量显著减少（P<0.001）,而MOCK组和NC组之间差异无统计学意义（P>0.05）;在Si Ha细胞中过表达TIM-1后,TIM-1组较MOCK组和NC组中处于细胞周期S期的细胞数量显著增加（P<0.001）,处于细胞周期G1期的细胞数量显著减少（P<0.001）,而MOCK组和NC组之间差异无统计学意义（P>0.05）。流式细胞术检测细胞凋亡能力结果显示,He La细胞和Si Ha细胞TIM-1组细胞凋亡率低于MOCK组和NC组,且差异有统计学意义（P<0.001）,而MOCK组和NC组两组间差异无统计学意义（P>0.05）。6.皮下裸鼠成瘤实验显示Si Ha细胞TIM-1组的裸鼠肿瘤生长速度、肿瘤荧光团、肿瘤大小、肿瘤重量均明显高于MOCK组和NC组的裸鼠（P<0.05）,而MOCK组和NC组间差异无统计学意义（P>0.05）。7.划痕愈合实验结果显示,与MOCK组和NC组相比,He La和Si Ha细胞的TIM-1组在划痕后24小时及48小时划痕间距相对更窄（P<0.001）,而在MOCK组和NC组之间差异无统计学意义（P>0.05）。Tranwell细胞迁移实验结果显示,与MOCK组和NC组相比,He La和Si Ha细胞TIM-1组每高倍视野（×200）穿透膜的细胞数明显增多,差异有统计学意义（P<0.001）,而在MOCK组和NC组之间差异无统计学意义（P>0.05）。Transwell细胞侵袭实验结果显示,与MOCK组和NC组相比,He La和Si Ha细胞TIM-1组每高倍视野（×200）穿透膜的细胞数明显增多,差异有统计学意义（P<0.001）,而在MOCK组和NC组之间差异无统计学意义（P>0.05）。8.Western blotting结果显示在He La和Si Ha细胞中过表达TIM-1能够显著上调cyclin D1和Bcl-2蛋白表达水平,同时下调p53和Bax蛋白表达水平。9.Western blotting结果显示过表达TIM-1能够显著上调He La和Si Ha细胞中N-cadherin、Vimentin、Snail1、MMP-2和VEGF表达水平,同时下调E-cadherin表达水平。10.Western blotting检测结果显示在He La和Si Ha细胞中过表达TIM-1能够显著上调PI3K、p AKT和m TOR蛋白表达水平,但对总AKT的表达无明显影响。结论:1.与正常宫颈上皮组织和CIN比较,TIM-1在人宫颈癌组织中呈高表达,并与是否累及阴道呈负相关;TIM-1在He La（HPV-18阳性）、Si Ha（HPV-16阳性）和C-33A细胞（HPV阴性）中都有表达。2.过表达TIM-1下调p53、Bax和E-cadherin的表达,上调cyclin D1、Bcl-2、Snail 1、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和VEGF的表达;PI3K、p AKT和m TOR蛋白水平也升高,而AKT总蛋白水平保持不变。TIM-1可以通过调控PI3K/AKT/p53和PI3K/AKT/m TOR信号通路促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力并抑制细胞凋亡,诱导EMT转变,参与宫颈癌的发生发展。3.TIM-1可能为宫颈癌诊断和治疗提供新的靶点。