灵芝作为我国医药宝库中的瑰宝,自古就有“仙草”、“瑞草”之称。由于灵芝孢子难于在人工条件下萌发,无法获得灵芝育种所需的单核菌株,这使常规的育种方法进展缓慢。本研究利用原生质体单核化技术,成功获得了灵芝的杂交菌株,经过出菇实验和农艺性状测定获得了具有杂交优势的灵芝菌株。本研究得出以下几个结论:1本研究利用生物统计学和分子生物学方法,根据遗传距离较远和农艺性状互补的原则选择亲本,最后确定GL0006、GL0012、GL0024、GL0030+2和GL0003+1作为杂交实验的亲本菌株。2.在原生质的再生实验过程中,发现不同交配型的单核菌株的萌发情况不同,而且萌发时间存在明显的先后顺序,一种交配型集中在前期,另一种则集中在后期。不同交配型的单核菌株在菌丝形态上也有差异。3本研究通过原生质体单核化获得了81株灵芝单核菌株,对单核菌株进行了交配型测定,获得了7种不同交配型的单核菌株。以此为材料进行杂交育种,获得了24株杂交菌株。4利用多种方法对杂交菌株进行了验证,确定获得杂交菌株不同与亲本。包括以下几个方面:对影响杂交菌株的菌丝生长的温度、pH值等因素进行了初步研究,并做了杂交菌株与亲本的拮抗反应、栽培料菌丝生长速度,发现杂交菌株30+2-7×24-7在30℃下菌丝生长速度最快达到0.9380 cm/d,杂交菌株06-6×30+2-7在栽培料中的生长速度最快达到0.460 cm/d,显示出杂交菌株与亲本之间的存在显著差异。5利用分子生物学的方法进行杂交菌株鉴定,发现杂交菌株的遗传物质来源于两个亲本。6测试了菌丝多糖,发酵液多糖,子实体多糖含量以及灵芝产量,并对数据进行了分析,发现杂交菌株30+2-7×24-7在多糖和产量方面与亲本和其他杂交菌株都存在显著的杂交优势。7实验结果发现杂交菌株产量和菌丝生长速度没有相关关系,还发现杂交菌株的优良性状与亲本的遗传距离也没有正相关性。