【摘 要】
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大豆具有丰富的营养,是植物蛋白和植物油的主要来源之一。大豆在生长过程中会遭受真菌、细菌和病毒等各种病原物的侵害,其中大豆花叶病毒病（Soybean mosaic virus,SMV）是在大豆中传播盛行,对大豆的产量和品质造成了很大的影响。逐渐流行起来的转基因技术已经在植物育种中得以广泛应用,利用转基因技术培育大豆抗SMV新品种,在大豆育种方面具有重要意义。有研究表明,真核翻译起始因子5A（euka
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大豆具有丰富的营养,是植物蛋白和植物油的主要来源之一。大豆在生长过程中会遭受真菌、细菌和病毒等各种病原物的侵害,其中大豆花叶病毒病（Soybean mosaic virus,SMV）是在大豆中传播盛行,对大豆的产量和品质造成了很大的影响。逐渐流行起来的转基因技术已经在植物育种中得以广泛应用,利用转基因技术培育大豆抗SMV新品种,在大豆育种方面具有重要意义。有研究表明,真核翻译起始因子5A（eukaryotic initiation factor 5A,e IF5A）能够促进一些特异m RNA的转移及相关特异基因的表达来应对各种生物或非生物胁迫,从而提高抵抗能力,但具体调控机理尚不清楚。本研究前期通过全基因组关联分析定位到一个与大豆花叶病毒相关的基因,以吉农74为试验材料,构建植物过表达载体p CAMBIA3301-GmeIF5A和基因编辑载体p CBSG015-GmeIF5A,利用农杆菌介导法和花粉管通道法将重组表达载体转入受体植株吉农74中,对得到的转基因植株进行功能鉴定,探讨该基因的表达调控与提高抗大豆花叶病毒病的可行性。研究结果如下:1.克隆得到一个702bp的目的基因GmeIF5A,其编码233个氨基酸,分子质量为25645.38Da,理论等电点为8.54,无信号肽无跨膜结构域,推测其为非分泌蛋白;2.荧光定量PCR分析显示,GmeIF5A基因在大豆组织中的表达量从高到低依次是叶、茎,最后是根;3.经PCR检测和Bar试纸条双重检测,确定出T2代转过表达载体阳性植株13株,T2代转基因编辑载体阳性植株14株,表明基因可以稳定遗传至T2代;4.Southern杂交结果表明,GmeIF5A基因已成功整合到吉农74的基因组中,整合位点和信号强弱有所不同;5.利用汁液摩擦接种法对转基因和非转受体植株接种SMV,结果表明:与非转受体吉农74相比,转基因编辑载体植株抗性得到了提高,从中抗上升到高抗水平;而转过表达载体植株的抗性从非转受体的中抗水平降低至感病水平。
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