MUC4亲和多肽的点击化学修饰及与胰腺癌细胞免疫荧光标记的实验研究

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目的:1,以MUC4亲和多肽ZP-16为模板,通过点击化学反应合成具有核素和荧光两种显像功能的双标多肽分子影像探针。2,将双标多肽进行细胞免疫荧光标记,对多肽的亲和功能进行鉴定。方法:1,双标多肽的合成:将多肽ZP-16叠氮化修饰,再通过点击化学反应合成载有荧光(罗丹明)和核素(131I)标记物的双标多肽。2,双标多肽的验证:将反应后的产物纯化收集,并进行γ计数、紫外吸收读数和LCMS检测。3,实验细胞的传代及铺板:本实验选用胰腺癌细胞Bx PC-3、CFPAC-1和肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞,传代培养到足够数量后行六孔板细胞爬片。4,双标多肽和二脒基苯基吲哚(DAPI)对选用细胞的双重免疫荧光标记实验:将双标多肽稀释为一定浓度梯度,联合DAPI,用直接免疫荧光法标记细胞,在倒置荧光显微镜下观察实验结果。结果:1、MUC4亲和多肽经点击化学反应修饰,结合紫外吸收读数,γ计数及LCMS检测,证实合成了荧光/核素双标多肽。经多次重复,均得到稳定产物(双标多肽)。2、双标多肽的γ计数与紫外吸收读数曲线趋势一致;经γ计数和罗丹明B读数计算,收集液体中碘标记率为78%,罗丹明标记率为68%,符合体内外实验要求。3、双标多肽的免疫荧光标记实验:BXPC-3细胞表现为强阳性玫瑰红色荧光,CFPAC-1细胞表现为弱阳性玫瑰红色荧光,PC12细胞表现为无荧光;DAPI的免疫荧光标记实验:Bx PC-3、CFPAC-1及PC12三种细胞均为阳性蓝色荧光。4、双标多肽联合DAPI的双重荧光标记在Bx PC-3细胞和部分CFPAC-1细胞上可见细胞膜红色、细胞核蓝色的双重荧光,而在PC12细胞上无此表现。结论:运用点击化学反应制备双标MUC4亲和多肽探针方法可行,步骤简单可靠,合成产物(双标多肽)稳定易重复。多肽ZP-16能够靶向MUC4蛋白,对胰腺癌细胞明显亲和;而对不表达MUC4蛋白的细胞无亲和表现。因此,多肽ZP-16可能成为靶向早期胰腺癌的载体。
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