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目的:本研究拟通过50μg/ml槟榔碱和低、高剂量加味丹玄口康干预大鼠口腔黏膜上皮细胞,模拟咀嚼槟榔时唾液中槟榔碱对上皮细胞的作用以及药物的干预,检测大鼠口腔黏膜上皮细胞中KLF4的表达,并通过观察记录上皮细胞株的生物学行为及相关基因β-catenin的变化,来阐明KLF4在OSF发生发展及癌变中所发挥的功能。方法:1.加味丹玄口康药物血清的制备:成年健康SD大鼠15只,随机分为3组:A:正常组、B:加味丹玄口康低剂量组、C:加味丹玄口康高剂量组。每组5只,分别以蒸馏水、加味丹玄口康4ml/kg、12ml/kg灌胃,2次/d,连续7d。无菌条件下颈动脉采血,配制成含10%大鼠血清的培养液备用。2.细胞培养传代:培养原代大鼠口腔黏膜上皮细胞。置于5%CO2、37℃培养箱中孵育,取对数生长期细胞进行实验。3.细胞干预分组:A组（NC组）:蒸馏水+10%正常大鼠血清+2%上皮细胞完全培养液;B组（ANE组）:50μg/ml ANE+10%正常大鼠血清+2%上皮细胞完全培养液;C组（LDM组）:50μg/ml ANE+10%低剂量加味丹玄口康药物血清+2%上皮细胞完全培养液;D组（HDM组）:50μg/ml ANE+10%高剂量加味丹玄口康药物血清+2%上皮细胞完全培养液。培养24h。4.指标检测:（1）显微镜下观察细胞形态变化及细胞密度;（2）Q-PCR技术检测KLF4、β-catenin的转录;（3）Western blot检测细胞KLF4、β-catenin蛋白的定量表达。结果:1.镜下观察:经槟榔碱干预后的B、C、D组,相对于正常血清组,细胞活力下降,密度降低,细胞形态改变,而含加味丹玄口康低、高剂量的C、D组,细胞活力、细胞密度较不含加味丹玄口康的B组均有改善,且变化与剂量呈相关性。2.Western blot结果:经槟榔碱干预后的B、C、D组,相对于正常血清组,KLF4表达降低,β-catenin表达增强。差异均有统计学意义。而含加味丹玄口康低、高剂量的C、D组相较不含加味丹玄口康的B组KLF4表达增强,β-catenin表达降低,差异均有统计学意义,且与剂量呈相关性。3.Q-PCR结果:经槟榔碱干预后的B、C、D组,相对于正常血清组,KLF4表达降低,β-catenin表达增强。差异均有统计学意义。而含加味丹玄口康低、高剂量的C、D组相较不含加味丹玄口康的B组KLF4表达增强,β-catenin表达降低,高剂量组与槟榔碱诱导组相比,差异有统计学意义。结论:1.50μg/ml槟榔碱作用于大鼠口腔黏膜上皮细胞,槟榔碱诱导组与正常血清组相比,槟榔碱诱导组KLF4表达降低;单位面积内细胞活力下降,细胞数目减少,细胞形态发生改变,细胞间间隙增大,出现异常核分裂象。2.加味丹玄口康能拮抗槟榔碱对于黏膜上皮细胞的细胞毒性,与槟榔碱诱导组相比,KLF4表达增强,细胞活力,增殖能力,细胞形态都得到改善。3.KLF4可能与口腔黏膜下纤维化及癌变相关,KLF4抑制Wnt/β-catenin信号通路的表达可能是加味丹玄口康抑制OSF癌变发生发展的机制之一。