论文部分内容阅读
圆头精子症是一种临床上十分罕见的疾病,临床表现为精子形态异常导致的男性不育,圆头精子症患者约占男性不育患者的0.1%。Ⅰ型圆头精子症表型明显并且特征单一,其精液中完全为圆头精子,有报道Ⅰ型圆头精子症患者精液中可存在占很小比例的异常顶体结构的精子。由于圆头精子症疾病的罕见性和特殊性,因此鉴定人类圆头精子症致病基因进展缓慢。随着世界医学水平的快速发展及基因组测序技术的创新,国内外已有研究前后成功克隆和鉴定少数人类圆头精子症致病基因,其后随着圆头精子症的动物模型研究的成功进展,使得基因诊断和治疗方法在圆头精子症上的运用成为可能,同时患者可以通过遗传咨询了解其致病基因的遗传性,防止后代再患此病。本课题的研究对象均来自2013年至2018年期间于我生殖中心门诊就诊确诊的圆头精子症患者和小顶体精子患者。所有入选对象的纳入标准为均符合:1.首先为本生殖中心男性不育门诊确诊的男性不育患者,未避孕未育1年以上;2.精液常规检测及精液巴氏染色形态学检测均为圆头精子或小顶体精子;3.为求生育在本生殖中心进行辅助生殖治疗的男性不育患者。本课题主要目的为探讨圆头精子症患者和小顶体精子患者卵胞浆内单精子注射（ICSI,intracytoplasmic injection of single sperm）联合辅助卵子激活（AOA,assisted oocyte activation）的辅助生殖治疗有效性并对患者进行DPY19L2基因缺失和突变检测分析。本实验收集Ⅰ型圆头精子症和小顶体精子患者的精液标本和外周血并提取其DNA,对Ⅰ型圆头精子症患者和小顶体精子患者进行精液常规、精子形态学检查以及患者辅助生殖治疗结局分析。利用DPY19L2特异性引物进行PCR扩增,扩增产物经Sanger测序技术进行测序,检测DPY19L2的缺失或突变。先对6个圆头精子症患者和2个小顶体精子患者的外周血DNA中进行DPY19L2基因侧翼序列（LCR1a,LCR1b,LCR1c,LCR2d,LCR2e）和1、11、22号外显子的扩增,检测DPY19L2基因缺失与否,发现3个圆头精子症患者P1、P3、P8存在DPY19L2外显子的缺失,5例未检测出DPY19L2外显子的缺失,随后对8个患者所有DPY19L2剩余外显子PCR扩增,结果发现3个圆头精子症患者表现为DPY19L2外显子的完全缺失,1个圆头精子症患者为DPY19L2的纯合突变,1个小顶体精子患者为DPY19L2的纯合突变。2个圆头精子症患者和1个小顶体精子患者未检测出DPY19L2的外显子缺失或突变。P7圆头精子症患者为DPY19L2基因的第3号外显子点突变c.368A>G;p.His123Arg,P6小顶体精子患者为DPY19L2基因的第16号外显子点突变c.1541G>A;p.Arg514His。结论:DPY19L2基因缺失或突变是圆头精子症的主要致病原因,其中3个圆头精子症患者为DPY19L2的基因完全缺失,1个圆头精子症患者为DPY19L2的纯合突变,1个小顶体精子患者为DPY19L2的纯合突变;ICSI联合AOA是圆头精子症和小顶体精子患者的有效辅助生殖治疗策略。