白藜芦醇对雏鸡免疫应激的调控及其机制研究

来源 :河南农业大学 | 被引量 : 10次 | 上传用户:jessiemaa18
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本论文通过饲养试验和体外细胞培养试验,研究了白藜芦醇(resveratrol,RES)对免疫应激雏鸡生长性能及免疫功能的调控作用及其分子机制,并探讨了RES通过NF-κB信号通路对免疫应激调控的细胞信号传导机制。试验一研究不同添加水平的RES对生产中频繁疫苗免疫的雏鸡生长性能的调控作用及其机制。选1日龄蛋雏鸡300只,随机分为5个处理组,每组6个重复,每个重复10只鸡。阴性对照组不免疫且饲喂基础日粮,RES试验组每周免疫一次且在基础日粮基础上添加0,200,400和800 mg/kg的RES。试验期40天。结果表明:免疫处理组的平均日增重(average daily gain,ADG)显著小于不免疫的对照组(P<0.05)。随着RES添加量的增加,免疫组雏鸡的ADG、血清IGF-1及肝细胞中的生长激素受体(GHR)mRNA表达量呈二次曲线增加(P<0.05)。肝细胞中NF-κB mRNA表达量、脾脏细胞中的IL-1β和TNF-αmRNA表达量随着RES水平增加线性降低(P<0.01)。小结:生产中频繁的疫苗免疫使雏鸡的生长性能受到抑制。在雏鸡日粮中添加400 mg/kg的RES能有效缓解免疫应激诱导的生长抑制。RES缓解免疫应激诱导的生长抑制的可能机制是:RES下调了NF-κB的表达及激活,从而使炎性因子TNF-α及IL-6的转录及表达量降低,缓解了机体炎性反应并促进了动物生长。试验二研究不同添加水平的RES对生产中频繁疫苗免疫的雏鸡免疫机能的调控作用及其机制。试验设计同试验一。结果表明:免疫组与对照组相比,鸡新城疫(newcastle disease,ND)、禽流感病毒H5(avian influenza virus H5,H5)和禽流感病毒H9(avian influenza virus H9,H9)抗体滴度及血清IgG水平显著升高(P<0.05)而CD4+/CD8+比率显著降低,胸腺和法式囊细胞凋亡显著增加(P<0.05),且胸腺细胞中死亡受体Fas的配体FasL的相对表达显著增加(P<0.05)。随着RES添加量的增加,CD4+/CD8+比率、ND和H5抗体滴度以及胸腺淋巴细胞增殖指数和胸腺相对重量呈二次曲线增加(P<0.05)而脾脏和法氏囊淋巴细胞凋亡率线性降低(P<0.05)。FasL表达量线性降低(P<0.05)。小结:生产中频繁的疫苗免疫提高了机体再次免疫应答抗体IgG水平却促进了免疫器官的细胞凋亡,使机体免疫机能受到抑制。在雏鸡日粮中添加400 mg/kg的RES能有效缓解免疫器官细胞凋亡并增强免疫系统功能,提高血清中ND、H5、H9、IgM抗体水平及CD4+/CD8水平。RES缓解免疫应激诱导的免疫抑制的可能机制是:RES通过抑制FasL促凋亡基因的表达从而减少了免疫应激诱导的淋巴细胞凋亡,促进了免疫器官细胞的发育和免疫功能。试验三研究RES对LPS诱导的雏鸡免疫应激的调控作用及其机制。通过给肉仔鸡在7日龄、21日龄和36日龄时注射LPS建立免疫应激模型,进一步探索RES对LPS免疫应激诱导的肉仔鸡生长性能和免疫功能的调控作用及其机制。选用1日龄肉仔鸡120只,随机分为4个处理组,每组6个重复,每个重复5只鸡。采用2×2因子设计:日粮类型(400 mg/kgRES或0 mg/kg RES)和免疫应激(注射LPS或生理盐水)。试验期49天。结果表明:在LPS刺激情况下,日粮RES添加使肉仔鸡血清中皮质酮水平显著降低(P<0.05),肉仔鸡生长后期以及平均日增重显著增加(P<0.05),料肉比显著降低(P<0.05)。LPS免疫应激情况下日粮添加400 mg/kgRES使免疫应激肉仔鸡胸腺指数显著增加(P<0.05),胸腺和肝脏细胞凋亡率显著降低(P<0.05);血清中SOD和T-AOC显著增加(P<0.05),MDA显著降低(P<0.05);血清中IgG和C3含量显著增加(P<0.05);淋巴细胞转化率和淋巴细胞亚群CD4/CD8比例显著增加(P<0.05)。小结:频繁的LPS免疫应激使肉仔鸡的生长性能和免疫功能受到抑制。免疫应激情况下,在日粮中添加RES能够减少肝脏细胞的氧化损伤和凋亡,提高肝脏代谢功能,改善肉仔鸡生长性能。日粮添加RES降低了免疫应激肉仔鸡淋巴细胞凋亡,增加免疫器官指数,使血清中IgG和C3含量增加,淋巴细胞转化率和淋巴细胞亚群CD4/CD8比例增加,增加机体的特异性免疫功能。试验四体外培养雏鸡外周血淋巴细胞研究不同水平的RES(0μg/mL;20μg/mL;40μg/mL;80μg/mL)对LPS刺激的雏鸡外周血淋巴细胞NF-κB信号通路的调控。结果表明:LPS刺激显著降低了淋巴细胞活性并增加了淋巴细胞凋亡率和凋亡蛋白的表达(P<0.05),并增加了外周血淋巴细胞培养液中TNF-α及ROS的表达水平。40μg/mL和80μg/mLRES添加显著降低了淋巴细胞凋亡率并增加了淋巴细胞活性(P<0.05)。RES添加使淋巴细胞培养液中NF-κB的活性显著降低,IκB蛋白的表达水平显著增加(P<0.05)。40μg/mL和80μg/mLRES添加使外周血淋巴细胞培养液中中Fas和Caspase-8凋亡蛋白的表达量显著降低(P<0.05)。小结:RES对NF-κB信号通路有负调控作用,从而缓解机体炎性反应和淋巴细胞凋亡。结论:白藜芦醇能缓解免疫应激诱导的雏鸡生长抑制和免疫功能抑制,其机制与其负调控NF-κB通路,抑制炎性因子和凋亡蛋白表达密切相关。综合雏鸡的生产性能和免疫功能考虑,日粮中白藜芦醇的适宜添加量为400 mg/kg。
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