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随着全球气候变化,土壤中磷的供应和保持也发生变化。磷是植物生长发育所必须的营养元素,土壤中磷主要以有机或者无机化合物的形式存在,不易被植物吸收利用。缺磷成为目前林业发展面临的一个重要难题,施用磷肥虽然能在一定程度上改善土壤中有效磷含量,但是磷肥利用率却很低,而且大量施用磷肥容易造成土壤板结、环境污染等问题。解磷微生物(Phosphate solubilizing microorganism,PSM)能够将土壤中难溶性磷向有效磷转化,从而为植物生长发育提供可利用的磷。因此本研究的目的是通过寻找具有解磷能力的细菌,利用其解磷能力来增加土壤中有效磷的含量,以此来缓解植物缺磷的问题,同时通过优化培养条件为微生物菌肥的配制提供科学依据,为解磷微生物在实际生活中的应用提供理论基础。主要结果如下:(1)通过平板初筛的方法从30份麻栎根际土壤中筛选出21株能够稳定遗传解无机磷能力的细菌菌株,之后使用液体培养法进行复筛,共筛选出12株解磷量在70.00mg/L以上的细菌,其M3和M49解磷能力较强,二者在无机磷固体培养基上的解磷指数分别为1.91和1.69,在液体培养基中的解磷量分别为190.67 mg/L和151.84 mg/L。(2)通过形态学的观察、生理生化试验并结合16S r RNA基因测序技术,确定解磷细菌M3为伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.),解磷菌株M49为乳酸菌(Lactococcus sp.)。(3)对解磷细菌的生长条件进行优化,分别对温度、初始p H、装液量进行优化,结果表明,在温度38℃,p H 6,装液量120 m L时伯克霍尔德氏菌M3的生长状况最佳;在温度为36℃,初始p H 7,装液量80 m L时,乳酸菌M49的生长状况最佳。(4)对解磷细菌的无机磷培养基进行优化,首先对伯克霍尔德氏菌M3和乳酸菌M49的碳源、氮源、硫酸镁、初始p H、接种量和摇床转速进行优化,之后对6种因素进行PB试验筛选出碳源、氮源和硫酸镁3种对M3的解磷能力影响较为显著的因素;筛选出碳源、氮源和初始p H对M49解磷能力的影响较为显著。(5)根据PB试验结果对解磷能力最强的伯克霍尔德氏菌M3和乳酸菌M49进行响应面优化,最后得到伯克霍尔德氏菌M3优化后的培养基为:葡萄糖12.109 g,酵母粉0.082 g,Na Cl 0.500 g,KCl 0.500 g,Mg SO4·7H2O 0.533 g,Fe SO4·7H2O 0.030 g,Mn SO4·H2O 0.030 g,Ca3(PO4)2 10.000 g,初始p H为6、接种量6%和摇床转速200r/min;乳酸菌M49优化后的培养基为:蔗糖10.237 g、蛋白胨0.082 g/L、Na Cl 0.5 g,KCl 0.5 g,Mg SO4·7H2O 0.5 g,Fe SO4·7H2O 0.03 g,Mn SO4·H2O 0.03 g,Ca3(PO4)2 10.0g,初始p H 7、接种量6%、摇床转速220 r/min。优化后伯克霍尔德氏菌M3和乳酸菌M49的解磷量分别为224.490 mg/L和186.518 mg/L,与未进行优化时相比解磷量分别提高了17.737%和22.839%。之后通过试验验证模型得到的最高解磷量与实际测量结果接近,证明该模型在优化解磷细菌培养条件方面具有一定利用价值。(6)因试验周期较短,选择生长较快的姬岩垂草作为研究对象对伯克霍尔德氏菌M3进行温室盆栽试验,试验结果表明:添加解磷细菌处理的姬岩垂草在接种解磷细菌10天后,伯克霍尔德氏菌M3在根际的定殖数量趋于稳定,不再出现减少的现象,此时解磷细菌M3的浓度约为7.7×10~4 CFU/g。在培养25天后,接种伯克霍尔德氏菌M3的姬岩垂草的鲜重和干重均有显著提高,差异比较显著。与未接种解磷细菌的的对照组相比,添加解磷细菌M3的姬岩垂草根际土壤中的有效磷含量随着时间的增加而增加,最后达到52.13 mg/L。