荧光标记技术是评价鱼类增殖放流效果的重要方式,作为一种兼具体内和体外标志的标记方法,已被广泛应用于标记硬骨鱼纲(Osteichthyes)和板鳃亚纲(Elasmobranchii)鱼类。钙黄绿素(Calcein,CAL),又名荧光素络合物,是一种小分子荧光染料,作为一种简便、有效的化学标记物,能在多种水生动物钙质和骨质结构上形成荧光标记,其荧光强度会随着荧光染料浓度的升高或浸染处理时间的增加而增强,且在鱼体上可保持100至360天不等。然而,根据相关研究表明,CAL浸染溶液浓度过高往往会对标记鱼体造成一定的毒性效应。因此,为了更好地完善和推广这一标记技术,本研究以鲢幼鱼(Hypophthalmichthys molitrix)为研究对象,开展了CAL对鲢幼鱼抗氧化酶和脂质过氧化水平的影响、CAL浸染标记鲢幼鱼的效果以及经CAL浸染标记后鲢幼鱼抗氧化酶水平的恢复研究三部分研究内容,旨在探究CAL浸染标记鲢幼鱼合适的浸染时间、浸染浓度以及为标记后鱼体的暂养管理提供数据支撑。研究结果有助于建立鱼类资源安全、有效的监测方法,对推动我国鱼类资源科学管理、生物多样性保护具有一定的理论和实践意义。本研究主要的研究结果如下:(1)当使用不同浓度CAL溶液浸染标记鲢幼鱼时,可引起鲢幼鱼的应激反应,随着浸染标记时间的延长,CAL对鲢幼鱼的鳃和肝脏造成不同程度的损伤。浸染处理后48 h,鲢幼鱼血清中AST和ALT的活力与对照组相比显著上调,但在第96 h时,与对照组相比,CAL浸染处理组AST的活力显著下调(P<0.05)。此外,在第24 h、48 h、72 h和96 h时,所有CAL浸染处理组鲢幼鱼血清中ALP的活力与对照组相比均显著上调(P<0.05);在浸染试验初期,CAL浸染处理组鲢幼鱼的鳃和肝脏中SOD、CAT、GPx和GST的活力与对照组相比均出现不同程度的上调。随着浸染标记时间的延长,部分浸染处理组鲢幼鱼的鳃和肝脏中抗氧化酶(如SOD、CAT和GST)的活力与对照组相比显著下调;此外,与对照组相比,在第48 h(P<0.05)、72 h(P<0.01)和96 h(P<0.01)时,CAL浸染处理组鲢幼鱼肝脏中MDA的含量呈现出上调的变化趋势。(2)当使用浓度≤200 mg/L的CAL溶液浸染标记鲢幼鱼时,可对鲢幼鱼进行标记,且对其生长状况(全长和体重)没有显著性影响(P>0.05),以及对浸染和养殖期间,鲢幼鱼的死亡率无显著性影响(P>0.05)。在鲢幼鱼的钙质结构矢耳石、鳞片(包括侧线鳞和非侧线鳞)、鳍条(包括背鳍、胸鳍、腹鳍、臀鳍和尾鳍)均产生了可检测的荧光标记。其中,当CAL浸染溶液浓度为150-200 mg/L时,可在鲢幼鱼的钙质结构耳石、鳞片和鳍条上产生较好的标记效果(标记质量≥2)。此外,侧线鳞和鳍条的标记效果要优于耳石,最佳标记效果为200 mg/L CAL溶液浸染处理组鲢幼鱼的侧线鳞。(3)当使用浓度为≤300 mg/L CAL溶液浸染标记鲢幼鱼时,虽引起鲢幼鱼产生应激反应,但经过养殖4 D后,CAL浸染处理组鲢幼鱼血清、鳃和肝脏中所有抗氧化酶活力与对照组相比均可恢复到正常水平(P>0.05)。其中,低浓度(100mg/L)CAL浸染处理组鲢幼鱼鳃和肝脏中的抗氧化酶活力恢复到正常水平所需的时间较短较,即在第24 h时,鲢幼鱼的鳃和肝脏中SOD和CAT的活力与对照组相比均可恢复到正常水平(P>0.05)。此外,与鳃相比,CAL对鲢幼鱼肝脏中抗氧化酶水平影响较大,即在第6 h时,100 mg/L CAL浸染处理组鲢幼鱼肝脏中SOD的活力可恢复到正常水平,以及在第24 h时,所有CAL浸染处理组鲢幼鱼肝脏中GPx活力也可恢复到正常水平。综合分析,当使用荧光染料CAL浸染标记鲢幼鱼时,其合适的条件为:浸染时间为24 h;浸染浓度范围为150-200 mg/L;浸染标记的鲢幼鱼暂养≥4 D后,再将其放流到江河和湖泊中。