芽孢杆菌产生的抑菌物质对多种病原菌有良好的抑菌作用,作为一种天然抑菌物质应用于多方面。本实验采用芽孢杆菌ZYCHH-01为实验菌株,以大肠杆菌为指示菌株,通过牛津杯法测定其抑菌圈的大小并判断其活性。对实验菌株的发酵培养基和发酵条件进行优化,研究了抑菌物质的生化特性,并对抑菌物质进行初步的分离纯化,探索其应用潜力。为提高芽孢杆菌ZYCHH-01产生的抑菌物质的活性,对其发酵培养基优化,确定培养基中的碳源、氮源以及各组分的浓度,优化后,以葡萄糖为碳源,蛋白胨为氮源,发现添加豆粕粉能提高抑菌物质活性。最佳培养基为:牛肉膏3 g/L,蛋白胨10g/L,氯化钠5 g/L,葡萄糖5 g/L,豆粕粉4 g/L。对芽孢杆菌ZYCHH-01发酵条件进行优化,单因素试验结果:培养基p H为8.0,接种量为3%,摇床转速为190 r/min,发酵温度37℃,种龄24 h,发酵时间27 h。根据单因素试验结果,结合响应面法研究培养基p H、发酵温度以及发酵时间对芽孢杆菌ZYCHH-01产生的抑菌物质活性的影响程度。结果表明,最佳发酵条件为:培养基p H为7.78,接种量为3%,摇床转速为190 r/min,发酵温度36℃,种龄24 h,发酵时间27.5 h。在此条件下抑菌圈最大直径均值为21.12 mm,与模型预测值21.20mm吻合。对芽孢杆菌ZYCHH-01产生的抑菌物质进行生化特性测定,其生化实验结果表明,上清液最小抑菌浓度为1:64,抑菌物质对蛋白酶敏感,对α-淀粉酶和纤维素酶不敏感,较耐储存,对有机溶剂和部分表面活性剂稳定,室温下抑菌物质在p H 5.0-9.0有很好的抑菌活性,p H 6.0-8.0内具有良好的热稳定性,经100℃处理30 min仍有较好的活性,对常见食源性病菌抑菌活性良好。采用硫酸铵沉淀法和乙醇沉淀法对抑菌物质进行粗提,使用Bradford法测定蛋白含量。实验结果表明,两种方法均能提取抑菌物质,但硫酸铵沉淀法明显优于乙醇沉淀法。对盐析过程中不同硫酸铵的饱和度对抑菌物质活性大小的影响进行探讨,发现采用80%饱和度的硫酸铵提取的抑菌物质活性最高。采用超滤离心管对抑菌物质脱盐,过DEAE-琼脂糖凝胶FF离子交换层析进行分离纯化,并对4个吸收峰进行抑菌活性测定,结果表明峰1抑菌活性最明显。