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塔里木兔(Lepus yarcandensis)是我国特有物种,为国家二级保护动物。近年,南疆部分区域对林业及农业的危害逐年加重。然而,近年国内野兔需求市场日趋火爆,偷捕盗猎、非法倒卖时有发生并呈上升趋势。为满足市场对塔里木兔的需求,减轻野生种群的压力,通过驯养繁殖,实现保护与利用紧密结合。但塔里木兔野性强、个体小、自然繁殖率低,且其繁殖机理不明、人工繁殖技术研究尚属空白。塔里木兔精液采集及其保存方法的研究,为“精子库的建立”及人工授精技术体系的建立提供试验数据参考。本研究以塔里木兔为试验对象,采用现代动物繁殖技术手段,研究塔里木兔精液采集及其保存方法,本研究包括以下6部分内容:1.筛选适合塔里木兔麻醉保定药物种类及剂量。采用3种麻醉保定药物(速眠新Ⅱ、戊巴比妥钠、乌来糖),按不同剂量进行药物保定,检测麻醉所需时间、麻醉持续时间、麻醉状态、不良反应等指标,探讨不同麻醉保定药物及其剂量对塔里木兔麻醉效果的影响。结果表明,3种麻醉药物均能有效诱导塔里木兔麻醉,其中速眠新Ⅱ(0.05 mL/kg)的麻醉效果较好,麻醉所需时间为6.3 min,麻醉持续时间为47 min,无不良反应,肌肉注射,且简单易行;其次为戊巴比妥钠(0.9 mL/kg),麻醉所需时间为7.3 min,麻醉持续时间为63 min,会发生不良反应,肌肉注射会产生局部麻醉,需静脉注射;乌来糖(3.0 mL/kg),麻醉所需时间为5.0 min,麻醉持续时间为35 min,会发生不良反应,肌肉注射会产生局部麻醉,需静脉注射。2.筛选适合塔里木兔人工采精方法。采用不同采精方法(解剖取精法、电刺激法、按摩法)进行精液采集,检测采精量、精子活力、精子密度等指标,探讨不同采精方法对塔里木兔精液采集效果的影响。结果表明,3种采精方法均能采集到精液,其中按摩法采精法效果最佳,采精量较高达0.20 mL、精子活力平均为0.65以上、且操作简单易行;其次为电刺激法,最佳射精电压为0.1-3.0 V、采精量达0.15 mL、精子活力平均为0.45以上,但操作繁琐技术要求较高;与其相比解剖取精法虽精子活力平均为0.73以上,但需要屠宰公兔。3.筛选适合塔里木兔精液保存稀释液。公兔精液采用不同稀释液(生理盐水、配方1、2、3、4)按1:5比例稀释后,在室温(20-25℃)条件下保存,并在不同时间点(0、4、8 h)采样,检测精子活力、畸形率、质膜完整率等指标,通过持续保存法检测精子存活时间,探讨不同稀释液对塔里木兔精液保存效果的影响。结果表明,塔里木兔精液在5种稀释液中保存,随着保存时间的延长精子活力和质膜完整率逐渐下降(P<0.05),精子畸形率上升(P<0.05);精子在不同稀释液中保存8 h时,各试验组精子活力极显著高于对照组(生理盐水组)(0.74、0.76、0.68、0.69对0)(P<0.01),但各试验组之间无显著性差异(P>0.05);配2的精子存活时间最长(41 h),显著高于配1(37 h)、配3(30 h)、配4(28 h)(P<0.05),但配3与配4之间无显著性差异(P>0.05)。4.筛选塔里木兔精液保存稀释液pH值。采用前一个试验所筛选的稀释液(配2)pH调至6.2、7.2、8.2,在室温(20-25℃)条件下保存,并在不同时间点(0、4、8 h)采样,检测精子活力、畸形率、质膜完整率等指标,通过持续保存法检测精子存活时间,探讨稀释液pH值对塔里木兔精液保存效果的影响。结果表明,塔里木兔精液在不同pH值培养液中保存,随着保存时间的延长精子活力、质膜完整率逐渐下降(P<0.05),精子畸形率逐渐升高(P<0.05);pH 7.2组精子活力,在保存4、8 h时,极显著高于pH 6.2和pH 8.2组(0.74、0.73对0、0.26)(P<0.01);pH 7.2组,精子存活时间最长(42 h),极显著高于pH 6.2(2.5 h)、pH 8.2组(6 h)(P<0.01)。5.筛选塔里木兔精液保存方法。采用前一个试验所筛选的稀释液(配2,pH 7.2),在不同条件即低温(4-5℃)、室温(20-25℃)、恒温(37℃)下保存,并在不同时间点(0、4、8 h)采样,检测精子活力、畸形率、质膜完整率等指标,通过持续保存法检测精子存活时间,探讨不同保存方法对塔里木兔精液保存效果的影响。结果表明,塔里木兔精子在不同保存条件下保存,随着保存时间的延长精子活力、质膜完整率逐渐下降(P<0.05),精子畸形率逐渐升高(P<0.05);低温和常温保存组精子活力,在4、8 h时,极显著高于恒温保存组(0.81、0.78对0.45;0.71、0.76对0.31)(P<0.01),但低温和常温保存组之间无显著性差异(P>0.05);常温保存组精子存活时间最长(40 h)显著高于低温保存组(32 h)(P<0.05),极显著高于恒温保存组(13 h)(P<0.01)。6.精液保存稀释液的人工授精试验验证。塔里木兔精液,分别在5种精液保存常用的稀释液(生理盐水、配方1、2、3、4)中常温(20-25℃)保存2 h后进行人工授精,并与自然交配进行对比,记录受胎率及平均产仔数等指标,探讨不同稀释液对塔里木兔受胎及产仔效果的影响。结果表明,圈养塔里木兔自然交配受胎率为60%,均高于其它组(P<0.05),生理盐水、配方1、2、3、4组受胎率分别为20%、30%、40%、30%、30%、其中配方2的受胎效果较高达40%。