论文部分内容阅读
背景和目的:肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)是常见的一种恶性程度高、进展速度快、容易复发转移、预后极差的恶性肿瘤。长期以来,由于缺乏比较有效的早期诊断指标,大多数肝癌在确诊时已处于中、晚期,预后较差,因此,寻求一些敏感的检测方法提高早期肝癌的检出率至关重要。近年来的研究发现了很多新的原发性肝癌血清标志物,并有希望成为其理想的早期诊断指标。甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP)是当前在临床上应用最普遍的肝癌诊断血清标志物之一,但AFP诊断肝癌仍然存在着一定的局限性,因为约40%的肝癌病患血清中的AFP水平处于低值甚至不表达,这大大的影响了AFP在诊断HCC过程中的临床价值。我们课题组成员在前期对于mi R-26b的研究中发现,其在肝癌组织中表达显著下调,并且与肝癌的增殖及侵袭转移相关,但是mi R-26在外周血中的表达及能否用于肝癌早期的检测尚需进一步的验证。高尔基糖蛋白-73(Golgiprotein,GP73)是一类高尔基Ⅱ型跨膜蛋白,主要在胆管的上皮细胞中表达,而正常肝细胞中很少甚至不表达,在急慢性肝炎或者肝纤维化时,GP73在肝细胞中的表达水平明显上升,而进展至肝硬化时其表达又进一步提高,发展到肝癌时,GP73的表达可达到高峰。本研究着重探讨循环mi R-26b、GP73和AFP在正常人、肝炎及肝硬化患者与肝癌患者外周血中的表达情况,并分析其作为肝癌的诊断标志物的灵敏度和特异度,采用AFP、mi R-26、GP73联合检测,以期提高HCC诊断的敏感度和阳性检出率,分析其作为分子标志物对肝癌作早期诊断的价值。方法:1.本研究将实验分成4个组,包括肝细胞癌组50例、肝硬化组40例、慢性肝炎组45例和健康对照组50例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)法检测各组人群全血中miR-26b的表达水平。2.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法定量测定各组血清中GP73的含量,化学发光方法定量测定AFP的含量。3.应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析并确定外周血中的mi R-26、GP73和AFP诊断HCC的最佳截断值(cutoff值),并利用ROC曲线评价mi R-26、GP73和AFP三者单独及联合检测(mi R-26+GP73、mi R-26+AFP、GP73+AFP、mi R-26+GP73+AFP)对早期诊断HCC的价值。结果:1.与肝硬化组、慢性肝炎组和健康对照组相比,mi R-26b在肝癌患者外周血中呈低水平表达,差异有统计学意义(P<0.05);肝硬化组、慢性肝炎组与健康对照组间两两对比,其差异无统计学意义(p>0.05)。2.HCC组患者血清GP73的水平[234.58(166.50-309.49)ng/ml)]显著高于肝炎肝硬化组[133.25(46.50-146.60)ng/ml]、慢性肝炎对照组[141.01(82.77-149.56)ng/ml]及健康对照组[43.50(37.06-49.63)ng/ml],差异有统计学意义(P<0.05);肝硬化组跟慢性肝炎组比较,差异无统计学意义(p>0.05)。3.ROC曲线分析显示外周血mi R-26b区分肝癌与肝硬化组、慢性肝炎组、健康对照组的ROC曲线下面积(AUC)为0.936,最佳截断值(cutoff value)为0.888,诊断敏感度和特异度分别为92%和87.5%;GP73诊断HCC的AUC为0.913,cutoff值为144.82ng/ml,灵敏度和特异性分别为84.0%和77.0%;AFP诊断HCC的AUC为0.718,最佳截断值为27.99ng/ml,敏感度与特异度分别为62.0%和68.9%。mi R-26b的敏感性,特异度最高,其AUC最大。4.在28例血清AFP呈低浓度(AFP<400 ng/ml)的HCC患者中,mi R-26b检出阳性(cutoff值≤0.888)的患者有24例,占AFP低浓度的HCC患者的85.7%(24/28);GP73检出阳性(GP73≥150ng/ml)的患者有16例,占AFP低浓度的HCC患者的57.1%(16/28)。mi R-26b、GP73的阳性检出率要远高于AFP(P<0.01)。5.以GP73≥150ng/ml,AFP≥400ng/ml作为诊断标准,mi R-26b、GP73对HCC诊断的灵敏度分别为86.0%、74.0%,明显优于AFP(44.0%)(P<0.01),特异度要较AFP差。根据ROC曲线来观察各标志物对HCC的诊断,mi R-26b、GP73与AFP的曲线下面积有显著性的差异(P<0.05)。6.mi R-26b、GP73对肝细胞癌的诊断效能优于AFP,在特异性提高的同时能在一定程度上降低AFP的漏诊率,有望成为新的肝癌血清学标记物。mi R-26b、GP73、AFP三者联合进行检测能提高HCC早期诊断的准确性。结论:1、肝细胞癌患者外周血中的mi R-26b表达降低,血液中mi R-26b可能作为一种新型肝细胞癌诊断的分子标志物,联合血清中AFP进行检测对诊断HCC具有重要的临床价值。2、GP73在HCC组血清中的表达显著升高,提示其可作为一种有意义的HCC血清分子标志物,为肝癌的诊断提供有意义的蛋白标记。3、外周血mi R-26b联合血清GP73、AFP检测对HCC诊断有积极意义,可用于高危人群的肝癌筛查。