论文部分内容阅读
近年来,氯胺酮的滥用现象日益严重,带来了较多的社会问题,2004年国家食品药品监督管理局已将氯胺酮(包括其可能存在的盐及制剂)列为第一类精神药品管理。因此,建立一种快速、可靠和低成本的氯胺酮检测方法具有十分重要的意义。本文合成了氯胺酮的全抗原,制备了氯胺酮多克隆抗体,并分别利用氯胺酮的多克隆抗体和单克隆抗体建立了氯胺酮免疫分析方法。利用氯胺酮的多克隆抗体,优化了免疫分析条件,建立了检测氯胺酮的酶联免疫吸附法和生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法。酶联免疫吸附法的线性范围为1-10000 ng/mL,最低检出限为0.61 ng/mL,对去甲氯胺酮、吗啡和可卡因的交叉反应率分别为35.73%,2.42%和1.09%。在氯胺酮生物样品的测定中,此方法的回收率均在86%到116%之间。生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法的线性范围为0.1-1000 ng/mL,最低检出限为0.03ng/mL,对去甲氯胺酮、吗啡和可卡因的交叉反应率分别为35.13%,1.09%和0.48%。在氯胺酮生物样品的测定中,此方法的回收率均在84%到116%之间。由此可知,与酶联免疫吸附法相比,生物素-亲和素放大体系酶联免疫吸附法的检测限更低,是一种具有特异性强、灵敏度高等优点的氯胺酮检测方法。利用氯胺酮的多克隆抗体,以间接酶联免疫吸附法为基础,异硫氰酸荧光素为荧光探针,建立了可快速、灵敏检测氯胺酮的荧光免疫法。在优化的免疫反应条件下,方法的线性范围为1-1000 ng/mL,最低检出限为0.48ng/mL。分别测定了不同浓度的氯胺酮在人体血清和尿液样品中的加标回收率,其测定结果均在89%到113%之间。利用氯胺酮的单克隆抗体,分别优化了免疫分析条件,建立了检测氯胺酮的酶联免疫吸附法和生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法。酶联免疫吸附法的线性范围为1-10000 ng/mL,最低检出限为0.18 ng/mL。对去甲氯胺酮、吗啡和可卡因的交叉反应率分别为10.50%,0.49%和1.57%。在氯胺酮生物样品的测定中,此方法的回收率均在90%到122%之间。生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法的线性范围为0.1-1000 ng/mL,最低检出限为0.03 ng/mL,对去甲氯胺酮、吗啡和可卡因的交叉反应率分别为10.02%,0.13%和0.15%。在氯胺酮生物样品的测定中,此方法的回收率均在91%到112%之间。由此可知,与酶联免疫吸附法相比,生物素-亲和素放大体系酶联免疫吸附法的检测限更低,而与多克隆抗体相比,利用单克隆抗体检测的交叉反应率更低,更适合对氯胺酮的专一检测。