论文部分内容阅读
目的:探究三叶苷（TLB）对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的大鼠神经炎症的影响及其可能的作用机制。方法:SD大鼠经适应性喂养14天后,双侧脑室（ICV）注射Aβ25-35溶液建立AD模型,假手术组大鼠注射等体积的生理盐水。采用简单随机法将大鼠分为7组:假手术组（n=15）,假手术+TLB 10 mg/kg组（n=15）,Aβ25-35组（n=15）,Aβ25-35+TLB 2.5 mg/kg组（n=15）,Aβ25-35+TLB 5 mg/kg组（n=15）,Aβ25-35+TLB 10mg/kg组（n=15）,Aβ25-35+多奈哌齐组（n=15）。假手术组和假手术+给药组大鼠ICV注射等体积生理盐水（NS）。连续灌胃14天后,通过新物体识别实验和Y迷宫实验检测大鼠的学习和记忆功能。通过尼氏染色观察AD大鼠海马神经元的形态学改变和损伤情况。ELISA法检测大鼠海马组织炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的释放情况。免疫组化染色法观察大鼠海马小胶质细胞标记物IBA-1及星形胶质细胞标记物GFAP的阳性表达情况。Western blot法检测大鼠海马中HMGB-1、TLR4、MyD88和TRAF6的蛋白表达以及p65-NF-κB的磷酸化水平。采用计算机分子虚拟对接技术检测TLB与HMGB1蛋白的结合能力。结果:假手术组与假手术+TLB（10 mg/kg）组大鼠在学习和记忆功能上无差异;模型组大鼠较假手术组大鼠学习和认知记忆能力损伤明显,新物体识别指数及空间探索自由交替率明显降低;大鼠海马CA1、CA3及DG区神经元排列紊乱,出现核深染及核固缩,大鼠海马内尼氏小体数目显著减少;大鼠海马内IBA-1及GFAP的阳性表达数量明显增加;炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显增加;HMGB1、TLR4、MyD88、TRAF6的蛋白表达和p65-NF-κB的磷酸化水平显著上调。而TLB（2.5、5、10 mg/kg）组较模型组大鼠新物体辨别指数和空间记忆探索自由交替率明显增加并呈浓度依赖性;海马神经元排列较为整齐,且细胞结构较为完整清晰,神经元存活数量均显著增多;TLB（2.5、5、10 mg/kg）组较模型组大鼠海马内IBA-1及GFAP的阳性数量明显减少;炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达减少;HMGB1、TLR4、MyD88、TRAF6的蛋白表达和p65-NF-κB的磷酸化水平明显下调。值得注意的是,TLB能够与HMGB1直接结合,其结合能为-5.06 kcal,氢键相互作用位点主要包括SerA14、SerA13、SerB46、MetA12和MetB44。结论:在本实验条件下,TLB能够有效改善Aβ25-35诱导的大鼠学习和记忆功能损害,其作用机制与通过调控HMGB1/TLR4信号途径抑制神经炎症相关。