【摘 要】
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血管内皮细胞凋亡是动脉粥样硬化形成的重要机制。因此通过药物干预,抑制其凋亡是防治动脉粥样硬化的重要策略。二苯乙烯苷(TSG)是一种二苯乙烯苷类化合物,通常从何首乌中提
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血管内皮细胞凋亡是动脉粥样硬化形成的重要机制。因此通过药物干预,抑制其凋亡是防治动脉粥样硬化的重要策略。二苯乙烯苷(TSG)是一种二苯乙烯苷类化合物,通常从何首乌中提取获得。本课题组的前期研究表明,TSG可以减少H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的凋亡。但目前还不清楚TSG是否具有其他的保护机制。本研究旨在研究TSG对外源性H2O2对HUVECs表达血红素氧合酶-1(HO-1)的影响,并探讨其在细胞凋亡中的功能。用300μmol/L浓度的H2O2处理体外培养HUVECs,建立内皮细胞凋亡模型。按分组要求,用不同浓度的TSG预处理HUVECs,然后利用实时荧光定量PCR在mRNA水平和Western blot在蛋白水平检测HO-1的变化情况;比色法测定HO-1酶活性变化;流式细胞术检测HUVECs的细胞凋亡;Western blot检测Nrf2核转位;干扰RNA及抑制剂分析HO-1对HUVECs凋亡的影响。实时定量PCR结果显示,阴性对照组HO-1 mRNA表达水平极低,H2O2处理后,HO-1仅有轻微增高。而给予不同浓度TSG处理后,HO-1 mRNA的表达与TSG浓度呈正相关。经过不同的处理时间,HO-1 mRNA其表达量不同,6h开始升高,峰值在12h,然后开始下降。HO-1蛋白表达水平与mRNA趋势一样。同时,采用RNA合成抑制剂放线菌素D和蛋白质合成抑制剂放线菌酮处理后,HO-1表达显著降低。此外,TSG能诱导Nrf2核转位。采用Nrf2siRNA转染细胞,HO-1表达降低。流式细胞术结果显示,H2O2可诱导HUVECs凋亡,利用TSG处理后,细胞凋亡率明显降低。TSG干预的同时给予HO-1抑制剂Zn PP处理后,细胞凋亡率上升至H2O2组水平;siRNA干扰HO-1表达后,细胞凋亡率和ZnPP处理组类似。而TSG联合HO-1激动剂CoPP处理,能进一步降低细胞凋亡率。以上结果表明TSG可能通过Nrf2诱导HUVECs表达HO-1,从而发挥对内皮细胞凋亡的抑制作用。
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