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目的胰腺癌是目前致死率最高的恶性肿瘤之一,被称之为癌中之王,5年生存率极低。因此,研究胰腺癌快速增殖和高度侵袭转移的原因,寻找其重要的致病因子,对早期诊断胰腺癌、研发有效治疗药物、改善患者的预后有着极其重要的意义。IQGAP1(IQ-motif-containing GTPase-activating protein 1)是一种支架蛋白,研究发现其在甲状腺癌、结肠癌、肺癌中等多种实体瘤高表达,促进肿瘤进展。但IQGAP1在胰腺癌中研究甚少,作用机制仍不清楚。本研究从临床标本、体外细胞实验、动物模型阐述其在胰腺癌进展中的作用机制,为治疗胰腺癌提供新的靶点。方法1探讨IQGAP1影响胰腺癌增殖能力的体内外研究:首先,利用胰腺癌临床标本比较IQGAP1在癌组织及癌旁组织的差异表达及其与临床病理学特征的相关性,并分析其与胰腺癌患者预后的关系;然后,设计针对IQGAP1基因的2个干扰RNA(siRNA)和过表达质粒,选用干扰效率最好的siRNA转染IQGAP1高表达的2种胰腺癌细胞,利用过表达质粒转染IQGAP1低表达的细胞株;其次,分别应用细胞增殖、平板克隆实验证明其对胰腺癌细胞体外生长的作用;最后,利用稳定转染的shIQGAP1构建裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型,分析IQGAP1对肿瘤生长的影响。2探讨IQGAPI影响胰腺癌侵袭及转移能力的体内外研究:首先,将构建好的si1QGAP1转染高表达胰腺癌细胞株、过表达质粒转染低表达细胞株,利用划痕实验和Transwell迁移实验检测胰腺癌细胞迁移及侵袭能力的改变;然后,分别利用Western-blotting和PCR技术检测EMT相关蛋白及相关转录因子的变化;其次,分析IQGAP1与调控胰腺癌进展的关键信号通路的关系;最后,建立裸鼠胰腺原位癌肝转移模型,分析IQGAP1对肿瘤体内转移情况的影响。结果1探讨IQGAP1影响胰腺癌增殖能力的体内外研究:利用免疫组化染色,Western-blotting和PCR方法发现胰腺癌组织中IQGAP1mRNA和蛋白阳性表达率较癌旁组织明显升高,与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关,而且IQGAP1高表达者提示预后较差,多因素分析提示IQGAP1为影响预后的独立因素。同时IQGAP1mRNA和蛋白在人胰腺癌细胞系中的表达都明显高于正常胰腺导管上皮细胞。通过转染siIQGAP1沉默SW1990和CFPAC-1细胞,过表达质粒转染PANC-1细胞证实siIQGAP1表达可抑制胰腺癌细胞增殖、克隆形成,而过表达IQGAP1则出现相反的结果。构建裸鼠胰腺癌移植瘤模型证实shIQGAP1组的瘤体积及重量均低于对照组。2探讨IQGAP1影响胰腺癌侵袭及转移能力的体内外研究:siIQGAP1可抑制胰腺癌细胞迁移及侵袭能力,siIQGAP1抑制DVL2、β-catenin及下游靶基因的表达,也抑制EMT相关蛋白及转录因子的表达;过表达IQGAP1则相反;免疫反应共沉淀提示IQGAP1能与DVL2、β-catenin形成复合物,在siIQGAP1干扰的细胞中发现DVL2与β-catenin结合明显减少;siDVL2则逆转了过表达IQGAP1引起的EMT过程。裸鼠胰腺原位癌肝转移模型提示shIQGAP1抑制胰腺癌肝转移。结论1 IQGAP1在胰腺癌组织及癌细胞系中均高表达,与病理分级、淋巴结转移及胰腺癌患者预后差明显相关,是影响胰腺癌患者预后独立危险因素。2 IQGAP1促进胰腺癌EMT及增殖、迁移,促进胰腺癌肝转移的发生。3 IQGAP1与DVL2、β-catenin形成复合物,干扰IQGAP1后DVL2与β-catenin结合明显减少,抑制DVL2可逆转IQGAP1过表达引起的EMT过程。