【摘 要】
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研究背景自体皮移植是临床治疗烧伤、大面积皮肤撕脱伤等皮肤创伤最有效的方法。目前临床趋向采用微粒皮移植,最大限度地利用表皮干细胞在创面扩增以修复创面,尽管如此,自体皮源不足的问题仍严重影响大面积皮肤创面的治疗,是再生医学急需解决的瓶颈问题。近年来,随着对皮肤附属器研究的深入,研究者发现毛囊才是皮肤最大的干细胞库[1-3],提示位于毛囊上段的隆突部干细胞具有运用于创面修复的巨大临床应用前景[4]。临床
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研究背景自体皮移植是临床治疗烧伤、大面积皮肤撕脱伤等皮肤创伤最有效的方法。目前临床趋向采用微粒皮移植,最大限度地利用表皮干细胞在创面扩增以修复创面,尽管如此,自体皮源不足的问题仍严重影响大面积皮肤创面的治疗,是再生医学急需解决的瓶颈问题。近年来,随着对皮肤附属器研究的深入,研究者发现毛囊才是皮肤最大的干细胞库[1-3],提示位于毛囊上段的隆突部干细胞具有运用于创面修复的巨大临床应用前景[4]。临床实践已观察到含有毛囊的头皮皮片具有促进创面修复的作用。最初在临床烧伤科植皮创面观察到:含有毛囊的皮片移植治疗慢性创面的愈合速度比不含毛囊皮片移植更快[5];临床试验对比含有与不含毛囊的相同面积皮粒创面移植效果,发现含有毛囊者修复速度比阴性对照组快,第18周修复面积比约为2.27:1。相关研究发现,当皮肤或毛囊出现损伤时,毛囊干细胞也可以迁移到损伤部位,并通过增殖分化来修补组织缺损[6-8]。综上所述,我们提出以下假说:毛囊上段（毛囊隆突部干细胞所在部位）移植至皮肤创面,可以促进创面愈合。目的1.构建大鼠背部皮肤创面模型,观察拔除毛干的触须毛囊上段自体创面移植对创面愈合的影响。2.观察毛乳头细胞分泌蛋白SDF-1在不同周期人头皮毛囊中的表达模式;外源性SDF-1大鼠背部皮内注射诱导,观察其对局部皮肤毛囊数量、形态等的影响。方法1.顺着毛囊生长方向在大鼠一侧触须垫上剪取一楔形皮条,从皮条上分离出触须毛囊,制作拔除毛干的大鼠触须毛囊上段。2.制作大鼠背部皮肤创面模型。3.实验分组及创面处理方法:将大鼠随机分为三组,实验组将8-9个大鼠触须毛囊上段贴于自体背部皮肤创面;阳性对照组将制作创面所剪下的大鼠背部皮肤修剪成约0.3cm×0.3cm的皮片,将8-9个皮片贴于自体背部皮肤创面;空白组不进行任何移植处理。4.包扎固定创口:为大鼠戴上防咬颈圈,防止大鼠啃咬自体创口;将大鼠分笼饲养,防止互咬创口。5.术后第3、7、14、21天观察创面修复情况,取材,制备石蜡切片,行HE染色观察形态学变化,行荧光免疫组化观察表皮干细胞标记物CK15的表达情况。6.制备人头皮切片,确定切片中毛囊的生长周期,使用荧光免疫方法观察毛乳头细胞关键分泌蛋白SDF-1在人头皮毛囊中的表达。7.外源性SDF-1诱导大鼠背部皮肤毛囊形成动物模型的构建。（1）在SD大鼠背部正中后段皮肤以电动剃毛刀备皮,使用脱毛膏脱毛后,用标记笔画出1.5cm×1.5cm的正方形区域;（2）实验分组及创面处理方法:将大鼠随机分成三组,SDF-1注射组均连续皮内注射300μl外源性SDF-1（浓度500ng/ml）10天;PBS注射组均连续皮内注射300μl PBS 10天;空白组:不进行任何移植处理。（3）实验后处理与观察:将每只大鼠分笼饲养,每天观察大鼠的背部毛发变化。实验第12天,处死大鼠后,SDF-1注射组、PBS注射组和空白组分别在实验区取等量皮肤组织制备石蜡切片,行HE染色,镜下观察毛囊形态、大小、结构并计数,统计学分析。结果1.大鼠触须容易提取,形态结构清晰,肉眼可辨。2.将大鼠触须毛囊上段移植至自体背部创面,肉眼未见明显皮岛形成,第15天镜下可见移植的毛囊上段表面形成新的表皮细胞层,CK15阳性表达,可见毛囊干细胞迁移轨迹。3.在人头皮毛囊中,SDF-1表达部位主要表达于退行期毛乳头。4.分别使用SDF-1、PBS在脱毛处理后的SD大鼠背部皮肤进行皮内注射10天,SDF-1注射组、PBS注射组、空白组均长出毛发,实验组背部皮肤增厚较阳性对照组和空白组明显。SDF-1注射组毛囊个数、毛囊单位个数明显多于PBS注射组、空白组,差异具有统计学意义。PBS组与空白组间没有显著统计学差异。结论1.大鼠触须毛囊上段移植至自体背部创面可以形成新的表皮层,新生的表皮很可能是毛囊干细胞迁移、分化形成的。2.SDF-1可诱导大鼠背部毛囊形成。
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