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那西肽产生菌属于链霉菌属中的活跃链霉菌。链霉菌在大规模工业生产和化学合成酶方面有特殊作用。链霉菌育种以及寻找新的链霉菌资源是一项活跃的领域。本论文在评述链霉菌育种方法的基础上,主要研究了那西肽产生菌活跃链霉菌的育种及发酵技术,继续提高高产活跃链霉菌的发酵单位,并尝试用基因工程的方法育种。在发酵试验方面,采用星点设计—效应面优化法寻找较优的发酵条件。 对那西肽产生菌活跃链霉菌采用了诱变、原生质体再生和原生质体融合等技术对菌种进行筛选。通过紫外线及亚硝基胍联合诱变获得的高产菌株7#UN16,发酵单位达2100μg/ml,与出发菌种(发酵单位1300μg/ml)相比,发酵单位提高了61.54%。 将7#UV、NTG、UV-NTG和转化13四个菌株融合,一次融合后不经筛选直接进行第二次融合,考察了其中的50个菌种,找到3个较好的菌株(相对于对照菌株),其中发酵单位最高的达1579.5μg/ml,与出发菌株平均发酵单位931.5μg/ml相比,发酵单位提高了69.57%。 用基因工程方法改良菌种的性状,实验表明有VHB蛋白存在的菌株与出发菌株相比,那西肽的产量明显提高,且转化菌株传代稳定。其中采用转化方法得到的9个菌株(平均发酵单位1536.3μg/ml)与出发菌株相比(发酵单位1351.3μg/ml),发酵单位提高13.69%;采用结合转移方法得到的9个菌株(平均发酵单位1394.7μg/ml)与出发菌株相比(发酵单位675.68μg/ml),发酵单位提高106.41%。 以(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl三种无机盐为考察对象,以那西肽产量为指标,采用星点设计的方法设计试验,用效应面优化法选取最佳工艺条件,用线性方程和二次多项式描述它们之间的数学关系,从分析结果中得到较优的数学模型为:y=987.4702+4421.41x1+1016216x2+21.428x3-11699.3x12+387.818x+22+1269.50x32-133.188x1x2+920.535x1x2-6870.71x2x3此模型的相关系数R=0.92604。